臓器への遺伝子導入法を用いた糖尿病治療の基礎研究

利用基因转移到器官治疗糖尿病的基础研究

• 批准号: 04671394
• 负责人: 金田 安史
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04671394/
• 关键词: 遺伝子治療; HVJ-liposome; インスリン; 糖尿病

当研究室では従来より外来遺伝子を核蛋白質HMG-1と共にリポソームに包み込みHVJの融合能を利用して効率よく個体の臓器へ導入し、遺伝子の発現に成功してきた。今回は糖尿病の遺伝子治療を目ざし、ヒトインスリンDNAの臓器への導入と発現を試みた。既にラットの肝臓へヒトインスリンgenomic DNAをvesicle complexを用いて導入し、一過性の発現に成功していた。今回は改良法のHVJ-liposome法を用いてヒトインスリンDNAをマウスの肝臓に導入したところ、ヒト空腹時血中の約2倍のインスリンがマウス血中に分泌された。しかし発現は約10日間で、その原因は導入DNAが核内でepisomal formとしてとどまり約10日間で崩壊するためである。そこで長期発現のため、1つは連続投与を種々の臓器に対して行なうこと、もう1つは核内で導入DNAを安定に保つ工夫を行なうこと、を目ざした。肝臓に1週間でとに計4回の打ち込みを行なった結果、ヒトインスリンが約1ケ月マウス血中に分泌された。部分肝切除は侵襲が大きく効率がよくなかった。連続投与の容易な筋肉内への注入も試みたが肝臓の場合よりインスリン分泌量は低かった。分泌インスリンが血糖降下に働くかどうかは大きな問題だが、マウスの血糖は一時的に130mg/dlより80mg/dlまで降下した。メカニズムは不明だが、プロインスリンが一部活性型に変換されているのかもしれない。ストレプトゾトシンで実験的な糖尿病をつくった場合は、ヒトインスリンを導入しても血糖を降下させることはできなかった。一方、核内でDNAを安定化させる因子として、HMG-1の他にヒストンやトポイソメラーゼ等も効果的だが、我々は最近、新たな染色体構築蛋白ρ40の分離に成功した。この蛋白のDNA安定化作用について目下検討中である。

When laboratory で は 従 to よ り foreign heritage 伝 son を nuclear protein HMG - 1 と altogether に リ ポ ソ ー ム に package み 込 み HVJ の fusion to be able to use a し を て sharper rate よ く individual の viscera へ import し, but 伝 の 発 に success now し て き た. Today back to は diabetes の heritage 伝 son treatment を mesh ざ し, ヒ ト イ ン ス リ ン DNA の viscera へ の import と 発 を now try み た. Both に ラ ッ ト の is crucial liver へ ヒ ト イ ン ス リ ン genomic DNA を vesicle complex を with い て import し, transient の 発 に success now し て い た. Today back to は improved method の HVJ を liposome method with い て ヒ ト イ ン ス リ ン DNA を マ ウ ス の is crucial liver に import し た と こ ろ, ヒ ト on an empty stomach blood の about 2 times の イ ン ス リ ン が マ ウ ス blood secretion に さ れ た. し か し 発 は now about 10 day で and そ の reason は import が nuclear DNA within で episomal form と し て と ど ま り about 10 day で collapse 壊 す る た め で あ る. そ こ で long-term 発 is の た め, 1 つ は even cast and を 々 続 の viscera に し seaborne て line な う こ と, も う 1 つ は で import within the nuclear DNA を settle に つ bao line trouble を な う こ と, を ざ し た. A routine liver に 1 week between で と に 4 back の play ち 込 み を line な っ た results, ヒ ト イ ン ス リ ン が ケ about 1 month マ ウ ス blood secretion に さ れ た. Partial hepatectomy がよくな invasive が large が く efficacy がよくな った った. When 続 is administered to <s:1>, it is easy for へ to be injected into the な muscle and へ to be injected into the みたが liver. In this situation, the secretion of よ and スリ スリ is low, resulting in a low <s:1> った secretion. Secretion イ ン ス リ ン が blood glucose lowering に 働 く か ど う か は big き な problem だ が, マ ウ ス の blood sugar は transient に 130 mg/dl よ り 80 mg/dl ま で lowered し た. Unknown メ カ ニ ズ ム は だ が, プ ロ イ ン ス リ ン が a reactive type に variations in さ れ て い る の か も し れ な い. ス ト レ プ ト ゾ ト シ ン で be 験 な diabetes を つ く っ た は, ヒ ト イ ン ス リ ン を import し て も lowered blood sugar を さ せ る こ と は で き な か っ た. Within the party, nuclear DNA を で stabilization さ せ る factor と し の て, HMG - 1 he に ヒ ス ト ン や ト ポ イ ソ メ ラ ー ゼ etc も unseen fruit of だ が, I 々 は recently, new た built な chromosomal protein separation rho 40 の に success し た. The DNA stabilization effect of <s:1> proteins に に て て て is currently 検 being discussed である.

项目成果

Ryuichi Morishita: "Novel and effective gene transfer technique for study of vascular renin angiotensin system" Journal of Clinical Investigation.

Ryuichi Morishita：“用于研究血管肾素血管紧张素系统的新颖有效的基因转移技术”临床研究杂志。

Yasufumi Kaneda: "Introduction and expression of the human insulin gene in adult rat liver" Journal of Biological Chemistry. 264. 12126-12129 (1989)

Yasufumi Kaneda：“成年大鼠肝脏中人胰岛素基因的介绍和表达”《生物化学杂志》。

Naruya Tomita: "Direct in vivo gene introduction into rat kidney" Biochemistry and Biophysics Research Communication. 186. 129-134 (1992)

富田成也：“直接体内基因导入大鼠肾脏”生物化学和生物物理学研究交流。

Yasufumi Kaneda: "Methods in Enzymology" Academic Press Inc.(San Diego,CA), 11

金田康文：“酶学方法”Academic Press Inc.（圣地亚哥，加利福尼亚州），11

Yasufumi Kaneda: "Increased expression of DNA cointroduced with nuclear protein in adult rat liver" Science(Wash.D.C.). 243. 375-378 (1989)

Yasufumi Kaneda：“成年大鼠肝脏中与核蛋白共引入的 DNA 表达增加”《科学》(Wash.D.C.)。