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Gunnラットへの遺伝子導入による先天性黄疸の解明と治療の基礎研究

基因导入Gunn大鼠阐明和治疗先天性黄疸的基础研究

基本信息

批准号：
04260213
负责人：
金田安史
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04260213/
关键词：
遺伝子治療 HVJ-liposome Gunnラット先天性黄疸ビリルビンUDPGT

项目摘要

先天性黄疸のモデル動物であるGunnラットを用いて原因遺伝子の解明と治療を目ざして月究を行なった。その原因は肝臓におけるグルクロン酸抱合に関わる酵素(UDPGT)の異常であるが、我々はそのうちの1つビリルビンUDPGTをラット肝cDNAライブラリーよりクローニングし,Gunnラットにおける変異についても解明した。今年度には、ビリルビンUDPGTのRFLPを分離し、マウス第一染色体のposition37にマップすることに成功した。このビリルビンUDPGTcDNAのGunnラットへの導入により先天性黄疸の治療を試みるため、このcDNAを強力に発現できるベクトターの構築,発現した酵素量を測定するための抗体の分離、invivoへの遺伝子導入法の改良を行なった。UDPGTcDNAをCMUエンハンサーとchick beta actin promoterをもつ発現ベクターに組込み、CHO細胞に電気パルスで導入し、48hr後に、UDPGTの発現を薄層クロマトグラフィーで確認できた。一方、抗体作成のためN末15アミノ酸の合成ペプチドを家兎に免疫し抗体を得た。この抗体が肝の小胞体膜蛋白中のUDPGTを認識するかどうか検索中である。invivoへの遺伝子導入については以前より我々がHVJ-liposome法として既に成果をあゲてきた。インスリン、B型肝炎ウイルス蛋白、レニンのラット肝での発現に成功している。肝細胞での発現を裏付けるために、今回我々は肝細胞特異的なpyruvate kinaseのプロモーターとエンハンサーを用いて肝臓での発現とインスリンによる発現の誘導に成功した。in vivo遺伝子発現の難導は、発現が一過性であることだが、その克服のために1週間に1度ずつ注入をくり返することにより約1ヶ月の特続発現に成功した。以上、今年度は研究目的のための基礎実験を行ない、各々成果をあゲ、研究の資材、方法等、準備が整った状況である。

Congenital jaundice was caused by Gunn. The cause of congenital jaundice was explained by the cause of the disease. The cause of the disease is due to the presence of acid-binding enzyme (UDPGT) in the liver, and we need to know that the UDPGT in the liver is different from that in the liver. The cause of the disease is different from that of the liver. The reason is that the cause of the disease is caused by the acid-binding enzyme (UDPGT). This year, the UDPGT RFLP was separated, and the first chromosome position37 was successfully separated. The diagnosis and treatment of congenital jaundice caused by UDPGTcDNA and Gunn were reported in this paper. The treatment of congenital jaundice was characterized by the treatment of congenital jaundice, the strong force of cDNA, the determination of enzyme content, the isolation of antibodies, and the improvement of the method. UDPGTcDNA