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制御性T細胞の抑制と腫瘍特異的な薬物送達を可能にするVirosomeの開発

开发病毒体以抑制调节性 T 细胞和肿瘤特异性药物输送

基本信息

批准号：
20015029
负责人：
金田安史
金额：
$ 6.14万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20015029/
关键词：
抗腫瘍免疫 HVJ 制御性T細胞 IL-12 癌治療標的導入生体適合性ポリマー

项目摘要

HVJ-Eはそれ自体が抗腫瘍免疫を活性化して抗腫瘍効果を発揮するが、なかでも樹状細胞に作用してIL-6を分泌させ制御性T細胞を抑制するできることは、他の免疫治療剤にはない特長である。IL-6産生にはHVJ-EのF蛋白質が関与する。一方、HVJ-EはInterferon-γの産生は直接促進せず、Effector T cellの増殖や活性化には直接作用しない。この能力が付与できれば、さらに強力な抗腫瘍効果が期待できる。そこでIL-12を表面に付加した高機能化HVJ-Eを作成し、CTL活性の増強を図ることを試みた。すでに報告し、特許化した方法に則って(Human Gene Ther. 2007, BBRC 2007、改変パラミクソウイルスおよびその作製方法WO2007/061141 A1)、HVJの膜蛋白のHNの欠失変異体(mutHN)に免疫グロブリンのFc領域を結合させ、これをもつFc-mutHN-HVJ-Eを作成する。マウスIL-12のp35,p40を遺伝子工学的に一本鎖にして、そのC末端にProtein-AのFc結合部分のZZ domainを付加する。培養細胞で大量に合成させて精製したIL-12-ZZをFc-mutHN-HVJ-Eに付加してIL-12-HVJ-Eを作成する。HVJ-Eの本来のレセプターへの結合を抑えるためintactHNはそのsiRNAをウイルス産生細胞に導入して欠損させる。このような方法によって作製したIL-12結合Virosomeは樹状細胞や脾細胞からInterferon-γを分泌させた。Interferon-α,-βやIL-6の産生能は保持していた。この高機能化HVJ-Eをメラノーマ腫瘍塊に直接投与する実験を行った。高機能化HVJ-Eでは100HAUの3回投与で、著明な抗腫瘍効果が認められ約30%のマウスで腫瘍が消失した。I1-12を結合させずに、HVJ-Eと混ぜ合わせて腫瘍塊に投与すると、腫瘍の消失は数%のマウスでしか起こらなかった。肺にメラノーマの転移結節をつくり、通常のHVJ-E, IL-12結合HVJ-Eを尾静脈より投与した。IL-12結合型HVJ-Eにより2週後の肺転移結節数は有意に減少した。マウスメラノーマにはIL-12受容体の発現が認められるという報告があり、抗腫瘍免疫の活性化以外に、腫瘍巣への標的化が可能になった可能性も示唆された。

HVJ-E has the ability to activate autologous anti-tumor immunity, to develop anti-tumor effects, to act on dendritic cells, to secrete IL-6, and to suppress T cells. IL-6 production is related to HVJ-E and F proteins. On the one hand, HVJ-E directly promotes the production of Interferon-γ, and Effector T cell directly promotes the proliferation and activation of interferon-γ. The ability to resist swelling is expected. IL-12 surface modification and high functional HVJ-E enhancement Report, Franchise, Methodology (Human Gene Ther. 2007, BBRC 2007, modified preparation method of HVJ membrane protein HN mutant (WO2007/061141 A1), fusion of HVJ membrane protein Fc domain, fusion of HVJ membrane protein Fc domain, fusion of HVJ membrane protein Fc domain Fc-mutant HN-HVJ-E. IL-12 p35,p40 protein is a key component of gene engineering, and its C-terminal protein-A and Fc binding domain are added. Cultured cells synthesize IL-12-ZZ in large quantities and purify IL-12-HVJ-E by adding IL-12-HVJ-E. The binding of HVJ-E to its original receptor is suppressed, and the introduction of intactHN's siRNA into cell-producing cells is impaired. This method is used to control IL-12 binding to Virosome dendritic cells and spleen cells. Interferon-α,-β and IL-6 production can be maintained. This high-functionality HVJ-E module is designed to be used directly by the user. High functional HVJ-E is 100HAU and 3 times more effective. About 30% of the anti-tumor effect disappears. I1-12 is a combination of HVJ-E and V-E. Lung cancer, usually HVJ-E, IL-12 in combination with HVJ-E in tail vein IL-12-binding HVJ-E was found to decrease the number of metastatic nodules in the lung after 2 weeks. The expression of IL-12 receptor was detected by ELISA, and the possibility of anti-tumor immune activation and tumor targeting was demonstrated.