制御性T細胞の抑制と腫瘍特異的な薬物送達を可能にするVirosomeの開発

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HVJ-Eはそれ自体が抗腫瘍免疫を活性化して抗腫瘍効果を発揮するが、なかでも樹状細胞に作用してIL-6を分泌させ制御性T細胞を抑制するできることは、他の免疫治療剤にはない特長である。IL-6産生にはHVJ-EのF蛋白質が関与する。一方、HVJ-EはInterferon-γの産生は直接促進せず、Effector T cellの増殖や活性化には直接作用しない。この能力が付与できれば、さらに強力な抗腫瘍効果が期待できる。そこでIL-12を表面に付加した高機能化HVJ-Eを作成し、CTL活性の増強を図ることを試みた。すでに報告し、特許化した方法に則って(Human Gene Ther. 2007, BBRC 2007、改変パラミクソウイルスおよびその作製方法WO2007/061141 A1)、HVJの膜蛋白のHNの欠失変異体(mutHN)に免疫グロブリンのFc領域を結合させ、これをもつFc-mutHN-HVJ-Eを作成する。マウスIL-12のp35,p40を遺伝子工学的に一本鎖にして、そのC末端にProtein-AのFc結合部分のZZ domainを付加する。培養細胞で大量に合成させて精製したIL-12-ZZをFc-mutHN-HVJ-Eに付加してIL-12-HVJ-Eを作成する。HVJ-Eの本来のレセプターへの結合を抑えるためintactHNはそのsiRNAをウイルス産生細胞に導入して欠損させる。このような方法によって作製したIL-12結合Virosomeは樹状細胞や脾細胞からInterferon-γを分泌させた。Interferon-α,-βやIL-6の産生能は保持していた。この高機能化HVJ-Eをメラノーマ腫瘍塊に直接投与する実験を行った。高機能化HVJ-Eでは100HAUの3回投与で、著明な抗腫瘍効果が認められ約30%のマウスで腫瘍が消失した。I1-12を結合させずに、HVJ-Eと混ぜ合わせて腫瘍塊に投与すると、腫瘍の消失は数%のマウスでしか起こらなかった。肺にメラノーマの転移結節をつくり、通常のHVJ-E, IL-12結合HVJ-Eを尾静脈より投与した。IL-12結合型HVJ-Eにより2週後の肺転移結節数は有意に減少した。マウスメラノーマにはIL-12受容体の発現が認められるという報告があり、抗腫瘍免疫の活性化以外に、腫瘍巣への標的化が可能になった可能性も示唆された。