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癌遺伝子治療のための新たな遺伝子発現増幅系の開発

开发用于癌症基因治疗的新型基因表达扩增系统

基本信息

批准号：
12217083
负责人：
金田安史
金额：
$ 3.14万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

癌に対する遺伝子治療の効果を高める目的で導入した遺伝子の発現増幅系の開発を行い、担癌マウスモデルでその効果を検証した。遺伝子発現増幅系としてセムリキ森林ウイルス(SFV)のレプリケースによる導入遺伝子の増幅を試みた。RNAを試験管内で合成して導入すると増幅がおこったが、plasmid DNAの形で導入してもBHK-21細胞以外の細胞では増幅がおこらなかった。次にクロマチンレベルでの転写制御をさらに増強させるためヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)の阻害剤を併用した導入遺伝子発現の増強系について研究を展開した。藤澤製薬の抗癌剤FR901228はHDAC阻害剤としてはたらき、遺伝子発現を増強できる。LacZ,Luciferase遺伝子をマウスメラノーマ細胞B16-F1導入してFR901228をかけると100nMで遺伝子発現を50倍増強できた。NIH3T3細胞では5000倍の増強があった。この増強はFR901228の量に依存して転写レベルでおこり、導入遺伝子が染色体外にあっても染色体に組み込まれていても同様におこった。またDNA microarrayを用いた検索から内在性の遺伝子の0.8%しかは発現が亢進せず、その増強も4倍以下であった。そこでマウスメラノーマを皮下に接種し、直径が7-8mmになったところでルシフェラーゼ遺伝子とFR901228を導入すると10μgの薬剤量で50倍の遺伝子発現が誘導された。この時の導入はHVJ-cationicliposomeが最も効率がよかった。そこでHSV-tk遺伝子とガンシクロビルを用いた自殺遺伝子治療にFR901228を併用すると劇的に自殺遺伝子治療の効果が増強され、約半数のマウスに完全寛解がおこり、これらマウスは腫瘍の再接種にも抵抗性を示した。

The aim of cancer gene therapy is to improve the development of gene expression system and to demonstrate the effect of cancer gene therapy. The increase in the amplitude of gene expression is due to the increase in the amplitude of gene expression in SFV. RNA synthesis was enhanced when plasmid DNA was introduced into cells other than BHK-21 cells. The research on the inhibition of HDAC and the enhancement system of HDAC induction gene production has been carried out. FR901228, an anti-cancer agent made by Fujisawa, responded to HDAC resistance and increased gene development. LacZ,Luciferase gene expression increased 50-fold when introduced into FR901228 cells. NIH3T3 cells are 5000 times stronger. This increase in the amount of FR901228 depends on the introduction of genes into the chromosome. The DNA microarray was used to detect the presence of 0.8% of the intrinsic gene, and the presence of the gene was increased by less than 4 times. Subcutaneous inoculation with a diameter of 7-8mm resulted in 50-fold induction of DNA at a dose of 10μg introduced into FR901228. This time the introduction of HVJ-causicliposome is the most effective. The effect of HSV-tk gene therapy on suicide gene therapy in combination with FR901228 increased significantly, with about half of the patients completely immune to the disease and showing resistance to revaccination.