光親和標識法による糖脂質関連蛋白の解析に関する研究

光亲和标记法分析糖脂相关蛋白的研究

• 批准号: 05274221
• 负责人: 賀佐 伸省
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05274221/
• 关键词: Glycosphingolipid; Photoaffinity Labeling; Lipoprotein; Azidosalicylate

各種スフィンゴ脂質を化学修飾して糖鎖プローブを作製し、それを用いた光親和反応によりヒト体液および癌細胞に存在するスフィンゴ脂質結合蛋白を検出した。更に、異なる糖鎖プローブによりこれら結合蛋白の一部を捕捉して免疫学的に同定した。即ち、GalCer,GM3、スルファチド(SO_4-3GalCer)およびスフィンゴミエリンのリゾ体をアジ化サリチル酸誘導体とし、それを放射標識後、ヒト脳脊髄液、血清および腎細胞癌細胞の抽出液(何れも未脱脂試料)とともに光照射したところ、用いた糖鎖プローブおよび生体試料に共通して66,36,28kDaの蛋白質が標識された。一方、ヒト血清を脱脂し、更にリポ蛋白質を除去して再度光親和標識したところ、上記蛋白質とは異なる成分(3バンド)が検出された。このことは未処理試料の標識された蛋白質がリポ蛋白質であることを示唆した。それを証明するため、上記リゾ脂質のビオチン化物を合成し、それを試料と混和後、固定化アゾジンで捕捉して抗リポ蛋白抗体により免疫染色したところ、36,28kDaはそれぞれアポ-E、アポ-A-Iと同定された。66kDaは脱アポ蛋白処理血清画分のイオン交換クロマト後の光親和標識からアルブミンの他にコレステロールエステル転移蛋白(Mr.=66kDa)である可能性が高い。スフィンゴ脂質とリポ蛋白質の結合はすべて非特異的であり、体液や培養細胞のスフィンゴ脂質に特異的な結合蛋白質を検索するにはこれらリポ蛋白質を除去する必要がある。

Various スフィンゴlipid chemically modified してsugar lock プローブを production し, それを using いたphotoaffinity Reaction to body fluids and the presence of cancer cells and the presence of lipid-binding proteins. More, iso-sugar lock プローブによりこれらbinding protein のpart を capture して immunological に同定した. That is, ち, GalCer, GM3, スルファチド(SO_4-3GalCer)およびスフィンゴミエリンのリゾ体をアジ化サリチル acid inducer とし, それをradiation labeling, ヒト鄳 spinal fluid, Serum および renal cell carcinoma cell extract (とれも non-defatted sample) とともに light irradiation したところ, use いThe sugar-locked biomass sample has a common protein of 66, 36, and 28 kDa. One side, ヒトserum を defatted, more にリポprotein を removed して re-photoaffinity label したところ, the above-mentioned protein とはdifferent なる ingredients (3バンド) が検出された. The label of the untreated sample is the protein of the untreated sample.それをproven するため, the リゾlipid compound のビオチンをsynthesisし, それをsampleとmixed, immobilizedアゾジンでCaptureしてAnti-リポ protein antibody により immunostaining したところ, 36,28kDa はそれぞれアポ-E, アポ-A-I and Tongding された. 66kDa decontaminated protein-treated serum was divided into photoaffinity markers after exchanging glucocorticoids. The probability of ンのにコレステロールエステル転袢protein (Mr.=66kDa) is very high.スフィンゴlipid and protein のbinding はすべてnon-specific であり、body fluid やcultured cells のスフィンゴlipidにspecificなbindingproteinを検SOするにはこれらリポproteinをremovalするnecessaryがある.

项目成果

M.Chiba,K.Tsuchihashi,K.Suetakeet al.: "Photoaffinity Labeling of Lipoproteins in Human Cerebro-spinal Fluid with a Heterobifanctional Oerivative of GalactosplSph." Biochem.Mol.Biol.Int.,. (印刷中). (1994)

M. Chiba、K. Tsuchihashi、K. Suetake 等人：“用 Biochem.Mol.Biol.Int. 的异双功能衍生物对人脑脊髓液中的脂蛋白进行光亲和标记”（正在出版）。 1994）