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基本転写因子TFIIEを介するRNAポリメラーゼIIの転写制御の分子機構解析

碱性转录因子TFIIE介导RNA聚合酶II转录调控的分子机制分析

基本信息

批准号：
03J50631
负责人：
田中亜紀
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

TFIIEの機能解析TFIIEαのN末側は転写に必要な領域であり、ヒトTFIIEαの1〜105番目のアミノ酸領域はwinged helix領域であることが明らかになった。この領域はβサブユニットも有している構造モチーフでタンパク質間相互作用、DNA結合に関わる。この領域の点変異体を作成しin vitro転写再構成系で転写活性の測定を行ったところ、25番目のフェニルアラニンと26番目のチロシンはTFIIEβサブユニットとの結合に必要なアミノ酸である可能性が示唆された。またwinged helix因子の中で、TFIIEαサブユニットに特徴的な長いウイングが転写開始から伸長への移行に機能する可能性が示唆された。TFIIEと相互作用する因子の検索タグを付けたTFIIEαサブユニットを発現するHeLa細胞から調製した核抽出液から、タグに対する抗体カラムでTFIIEと相互作用する因子を単離した。TFIIEβサブユニットはαサブユニットと同程度の比率で精製されており、さらにいくつかの因子を含んでいた。これらの因子をMaldi-TOFマススペクトルで同定を試みたが、量的に同定できなかった。TFIIEαは細胞内で厳密に制御されているようで、過剰に発現すると細胞が生存できない。そのためマススペクトルのサンプル量を確保することは難しく、新たにタグを付けたTFIIEβを発現するHeLa細胞株を樹立し、核抽出液を調整している。

TFIIE's function analysis TFIIEα's N terminal side is written in the necessary field, TFIIEα's 1 ~ 105 points are written in the acid field, and the twisted helix field is written in the clear field. This domain is related to plasmatic interaction and DNA binding. The point of formation of this domain is to determine the activity of TFIIEβ and to determine the possibility of TFIIEβ to be combined with TFIIEβ. In the middle of the winged helix factor, TFIIEα shows the possibility of the transition function from the beginning of writing to the extension of the transition function. TFIIE interaction factors are detected in HeLa cells, and TFIIE interaction factors are detected in HeLa cells. TFIIEβThis is the first time that we've seen this. TFIIEα is a cell that controls cell survival by closely controlling the cell's growth and development. The HeLa cell line was established and the nuclear extract was adjusted.