白血病の原因となる融合遺伝子mRNAの動態とそれを標的とするリボザイムの設計

导致白血病的融合基因 mRNA 的动态及其靶向核酶的设计

• 批准号: 09278228
• 负责人: 神津 知子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278228/
• 关键词: 白血病; ハンマーヘッドリボザイム; アンチセンス; 遺伝子治療; RNase H

リボザイムは遺伝子発現の抑制やがんの治療に応用できる新しい魅力的な手段である。私共は、t(8 ; 21)転座型急性骨髄性白血病の融合遺伝子AML1-MTG8mRNAの融合点近傍の4つの部位を標的としてDNA/RNAキメラハンマーヘッド型リボザイムを作製した。各々のリボザイムのin vitroでの標的RNA切断効率は、高いものと低いものでは約100倍の違いがあった。次に、in vitroのリボザイム活性が、細胞内での標的mRNA切断活性を反映するかどうかを検討する目的で、AML1-MTG8mRNAを発現する白血病細胞株SKNO-1の分離核を用いてリボザイム活性測定系を作製した。AML1-MTG8mRNAの切断は、RNaseプロテクション法により検出した。AML1-MTG8リボザイムは、白血病細胞株の分離核内で、内在性のAML1-MTG8mRNAを濃度依存的に切断した。次に、核内のAML1-MTG8mRNAの切断産物を解析した結果、リボザイムはアンチセンス効果により内在性のRNase Hを活性化し、切断を起こすことが見い出された。更に標的とするAML1-MTG8mRNA融合領域に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドをシリーズで作製し、分離核での切断活性を検討した結果、この標的領域がアンチセンスホットスポットであることが示唆された。したがって、このリボザイムの標的領域は核内で露出しており、アンチセンスオリゴヌクレオチドが結合しやすい部位であることを示している。分離核系における切断活性の強さは、リボザイムによる細胞増殖抑制効果と相関することから、この分離核系は、リボザイムやアンチセンスによる内在性RNase H活性化によって起こる標的mRNA切断活性を定量的に解析する系として有用であり、今後の発展が期待できる。

A new and attractive means of treatment for the development of anti-inflammatory drugs. The fusion gene AML1-MTG8 mRNA in patients with acute osteoblastic leukemia (AML), t(8 ; 21), and t (8 ; 21) is targeted at four sites near the fusion point of DNA/RNA. The RNA cleavage efficiency of each target is about 100 times higher than that of the target. In addition, in vitro mRNA expression activity and intracellular target mRNA cleavage activity were measured for the purpose of detecting AML1-MTG8 mRNA expression in leukemia cell line SKNO-1. AML1-MTG8 mRNA cleavage, RNase selection and detection AML1-MTG8 mRNA expression in isolated leukemia cell lines is concentration-dependent and intrinsic. Next, the cleavage products of AML1-MTG8 mRNA in the nucleus were analyzed. The results showed that the intrinsic RNase H was activated and the cleavage was initiated. The target AML1-MTG8 mRNA fusion domain was further investigated for its activity in the control and separation of nuclei. The target area is exposed in the core, and the target area is exposed in the core. A quantitative analysis of the intrinsic RNase H activity of target mRNA in isolated nuclear lines is expected to be useful and useful for future development.

项目成果

E.Sueoka, T.Kozu,et al.: "Tumourgenicity of MTG8,a leukaemia related gene,in concert with v-Ha-ras gene in BALB/3T3 cells" Br.J.Haemotol.(in press). (1998)

E.Sueoka、T.Kozu 等人：“白血病相关基因 MTG8 的致瘤性，与 BALB/3T3 细胞中的 v-Ha-ras 基因一致”，Br.J.Haemotol.（出版中）。

T.Kozu et al.: "Significance of MTG8 in leukemogenesis" Leukemia. 11(S3). 297-298 (1997)

T.Kozu 等人：“MTG8 在白血病发生中的意义”白血病。

E.Sueoka, T.Kozu,et al.: "Expression of the tumor necrosis factor α gene and early response genes by nodularin,a liver tumor promoter,in primary cultured rat hepatocytes." J.Cancer Res.Clin.Oncol. 123. 413-419 (1997)

E. Sueoka、T. Kozu 等人：“在原代培养的大鼠肝细胞中，结节蛋白（肝脏肿瘤促进剂）表达肿瘤坏死因子 α 基因和早期反应基因。” .413-419 (1997)

E.Sueoka,et al.: "Mechanisms of growth inhibition of human lung cancer cell line,PC-9 by tea polyphenols" Jpn.J.Cancer Res.88. 639-643 (1997)

E.Sueoka等人：“茶多酚抑制人肺癌细胞系PC-9生长的机制”Jpn.J.Cancer Res.88。

E.Sueoka,et al.: "Molecular pathogenesis of interstitial pneumonitis with TNF-α transgenic mice" Cytokin. (in press). (1998)

E. Sueoka 等人：“TNF-α 转基因小鼠间质性肺炎的分子发病机制”Cytokin（出版中）。