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白血病の原因となる融合遺伝子mRNAを標的とするリボザイムの設計

设计一种针对导致白血病的融合基因 mRNA 的核酶

基本信息

批准号：
10174230
负责人：
神津知子
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10174230/
关键词：
リボザイム白血病融合遺伝子アンチセンス RNase H 遺伝子治療

项目摘要

私共は、t(8;21)転座型白血病融合遺伝子AML1-MTG8をモデルとして、融合mRNAのみを選択的に切断するリボザイムを設計している。融合点近傍を標的とするDNA/RNAキメラハンマヘッドリボザイムを作製し、これまでに1) 各々のリボザイムでは触媒効率が大きく異なること、2) t(8;21)転座型白血病細胞株SKNO-1に対して増殖抑制効果を示すこと、3) SKNO-1細胞の分離核を用いてこれらのリボザイムの内在性AML1-MTG8mRNA切断のメカニズムを解析した結果、アンチセンス効果を持つこと、4) AML1-MTG8mRNAの融合領域は核内で露出しており、アンチセンス/リボザイムの格好のターゲットである、等を見い出した。本研究では、分離核を用いてさらにアンチセンス効果とリボザイム触媒活性を検討した。SH阻害剤によって内在性RNase Hを抑えると、DNA/RNAリボザイムのアンチセンス効果はなくなり、リボザイム触媒活性による切断が検出された。All-RNAリボザイムでもAML1-MTG8mRNAの特異的な切断が検出した。従って、リボザイムは核環境内でアンチセンス効果よりは弱いが、確かに触媒活性を示すことが明かとなった。DNA/RNAリボザイムやアンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞増殖抑制効果は、強力ではあるがリバーシブルであるため、連続投与が必要である。そのため、リボザイムを細胞内で継続的にかつ効率よく発現させる系が有効である。そこで、CMVプロモーターによるリボザイム発現ベクターを作製し、SKNO-1細胞で一過性に発現させると、AML1-MTG8mRNAの減少が見られた。現在より強いリボザイム発現ベクターを開発中である。これらの結果より、融合遺伝子の発現を抑えるリボザイムによる白血病遺伝子治療が可能であることが示唆され、今後の発展が期待できる。

The fusion gene AML1-MTG8 was designed for the fusion of T(8;21) and T(8;21). DNA/RNA fusion sites near the target are controlled by 1) the catalytic efficiency of each site is different; 2) t(8); 21) To demonstrate the inhibitory effect of proliferation on the follicular leukemia cell line SKNO-1; 3) To analyze the intrinsic AML1-MTG8 mRNA cleavage in this isolated nucleus of SKNO-1 cells, and to confirm the effectiveness of the analysis; 4) The fusion domain of AML1-MTG8 mRNA is exposed in the nucleus, A good idea is to have a good time. In this study, we investigated the catalytic activity of the separation nucleus. SH inhibitor, intrinsic RNase H inhibitor, DNA/RNA inhibitor, catalytic inhibitor All-RNA expression was detected by specific cleavage of AML1-MTG8 mRNA. The results of the reaction in the nuclear environment are as follows: The DNA/RNA gene expression system can be used to inhibit the proliferation of cells. It's a good idea. In addition, the expression of AML1-MTG8 mRNA in SKNO-1 cells was reduced. Now, it's time for you to open up. The results show that fusion gene development is possible, and future development is expected.