白血病の原因となる融合遺伝子mRNAを標的とするリボザイムの設計

设计一种针对导致白血病的融合基因 mRNA 的核酶

• 批准号: 11155224
• 负责人: 神津 知子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11155224/
• 关键词: リボザイム; 白血病; 融合遺伝子; アンチセンス; トランスジェニックマウス; 遺伝子治療

私共は、t(8;21)転座型白血病融合遺伝子AML1-MTG8をモデルとして、融合mRNAのみを選択的に切断するリボザイムを設計している。融合点近傍を標的とするDNA/RNAキメラリボザイムは、リボザイム活性とアンチセンス効果を合わせ持ち、白血病細胞株の核内で強力にAML1-MTG8 mRNAを切断し、さらにAML1-MTG8蛋白質産生を抑制した。しかし、DNA/RNAリボザイムやアンチセンスオリゴの抑制効果は一過性であるため、連続投与が必要である。そこで、リボザイムを細胞内で継続的にかつ効率よく働かせる発現ベクターを得る目的で、RNA発現カセットの検討を行った。RNAポリメラーゼIIおよびIIIプロモーターを含む、即ちCMV、プロモーターの4種類の発現カセットを用い、それぞれリボザイムを白血病細胞内で発現させ、発現量、localization、AML1-MTG8mRNA切断効率について検討した。CMVプロモーター/polyAシグナルを持つ発現カセットを用いてリボザイムを白血病細胞に導入し発現させると、リボザイムの発現量に比例して、72時間までAML1-MTG8 mRNAが減少した。標的部位の配列を組み込んだルシフェラーゼレポーター遺伝子を作製し、CMV/リボザイムの切断活性をレポーターアッセイしたところ、CMV/リボザイムはAML1-MTG8を特異的に認識し、AML1およびMTG8は切断しなかった。U1 snRNA、U6 snRNA、tRNAプロモーターを用いた場合、リボザイムの発現量は多いにもかかわらず、有効なAML1-MTG8 mRNAの切断は見られなかった。これらの転写産物は主に核内に蓄積しており、AML1-MTG8 mRNAとcolocalizeしないため、切断効果を示さないと考えられる。したがって、リボザイムが有効に機能するためには、その発現量よりは標的mRNAとcolocalizeすることが必要であることが示唆された。一方、in vivoでの効果を解析するための白血病モデルマウスの作製は、これまでにカテプシンG・テトラサイクリントランスアクチベーター(Tet TA)のトランスジェニックマウス、及びTetオペレーター・AML1-MTG8トランスジェニックマウスを得た。現在これらを交配し、F1マウスを作製中である。

The fusion gene AML1-MTG8 was designed for the fusion of T(8;21) and T(8;21). DNA/RNA binding near fusion sites is strongly mediated by cleavage of AML1-MTG8 mRNA and inhibition of AML1-MTG8 protein production in leukemia cell lines. DNA/RNA release is transient, continuous and necessary. For example, if you want to find out more, you can find out more. The four types of RNA molecules, including CMV and MTG8, are detected in leukemia cells, and their expression, detection, localization, and AML1-MTG8 mRNA cleavage efficiency are examined. The expression of AML1-MTG8 mRNA was reduced in 72 hours after CMV infection. The alignment of target sites is divided into two groups: control, CMV/CDV, AML1-MTG8, and CDV/CDV. When U1 snRNA, U6 snRNA, tRNA are used, the expression of AML1-MTG8 mRNA is detected. These products are mainly accumulated in the nucleus, AML1-MTG8 mRNA is colocalized, and the results are cut off. It is necessary to colocalize the target mRNA. A party, in vivo analysis of the results of the analysis, the white blood disease, the operation of the system, such as the G·category, the category, and the category, AML1-MTG8 category. F1 is now in production.

项目成果

E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Association of MTG8(ETO/CDR), a leukemia-related protein, with serine/thrreonine protein kinases and heat shock protein HSP90 in human hematopoietic cell lines." Jpn.J.Cancer Res.90. 60-68 (1999)

E.Sueoka、T.Kozu 等人：“白血病相关蛋白 MTG8(ETO/CDR) 与人类造血细胞系中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶和热休克蛋白 HSP90 的关联。”

E.Sueoka, et al.: "Synergistic effects of(-)-epigallocatechin gallate with (-)-epicatechin, sulindac, or tamoxifen on cancer preventive activity in human lung cancer cell line, PC-9"Cancer Res.. 59. 44-47 (1999)

E.Sueoka 等人：“(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯与 (-)-表儿茶素、舒林酸或他莫昔芬对人肺癌细胞系 PC-9 中癌症预防活性的协同作用”Cancer Res. 59。