血管平滑筋の細胞周期調節機構とシグナル伝達系との相互作用に関する検討

血管平滑肌细胞周期调控机制与信号转导系统相互作用的研究

• 批准号: 09281206
• 负责人: 平田 恭信
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09281206/
• 关键词: 転写因子; GATA-6; 血管平滑筋細胞; 線維芽細胞; 細胞増殖

血管平滑筋に存在するGATA結合転写因子のisoformを検討するとともに、その発現調節機構および細胞増殖に対する作用を調べた。1)degenerate primersを用いて増幅したZF domainの塩基配列を調べた所、全てのクローンはGATA-6をコードしていた。Library screeningにより単離されたヒトGATA-6は449個のアミノ酸から構成され、推定分子量45.3KDであった。2)静止期のヒトおよびラット培養血管平滑筋細胞を血清で刺激すると、刺激後4hrをピークにGATA-6 mRNAのレベルは著明に減少した。3)GATA-6は蛋白レベルで血管平滑筋に発現されていた。4)deletion mutantを用いた解析からZF domainおよびそのC末端側の塩基性アミノ酸に富むbasic domainがDNAに結合するために必要な領域であった。5)ラット培養血管平滑筋細胞にtransfectされたGATA-6 wild type(GATA-6wt)はZF domainを欠失mutant(GATA-6DZF)に比べ、BrdUの取り込みを60%抑制した。またp53-/-マウス線維芽細胞においてもGATA-6wtはBrdUの取り込みを95%抑制した。p53-/-マウス線維芽細胞ではGATA-6wtを取り込んだ細胞にp21の強い発現を認め、またp21のpromoterはGATA-6wtにより活性化された。さらにp21-/-マウス線維芽細胞においては、GATA-6wtのBrdU取り込み抑制作用は弱く37%の抑制であった。結論:血管平滑筋に発現されるGATA結合転写因子の主要なisoformはGATA-6であり、血管平滑筋細胞において過剰に発現されたGATA-6は細胞周期のS期進入を抑制し、この作用の少なくとも一部はp53を介さないp21の発現増加による事が示唆された。

Vascular smooth muscle に exist す る GATA planning write factor の isoform を beg す 検 る と と も に, そ の 発 now adjusting mechanism お よ び cells raised colonization に す seaborne る role を adjustable べ た. 1) the degenerate primers を with い て rights of し た ZF domain の salt base with column を adjustable べ た, full て の ク ロ ー ン は GATA - 6 を コ ー ド し て い た. Library screening に よ り 単 from さ れ た ヒ ト GATA - 6 は 449 の ア ミ ノ acid か ら constitute さ れ presumption, the molecular weight of 45.3 KD で あ っ た. 2) stationary phase の ヒ ト お よ び ラ ッ ト を serum で culture vascular smooth muscle cells stimulate す る と and 4 hr after stimulation を ピ ー ク に GATA - 6 mRNA の レ ベ ル は zhao Ming に reduce し た. 3)GATA-6 レベ protein レベ で vascular smoothing tendon に occurrence されて た た た 4) deletion mutant を with い た parsing か ら ZF domain お よ び そ の C terminal side の salt basic ア ミ ノ acid に rich む basic domain が DNA に combining す る た め に な necessary field で あ っ た. 5)ラット cultured vascular smooth tendon cells にtransfectされたGATA-6 wild type(GATA-6wt) 込みを ZF domainを mutant(GATA-6DZF)に inhibited べ た by taking <s:1> 込みを60% compared with べ and BrdU. Youdaoplaceholder0 p53-/- ウス ウス line of germ bud cells にお て て <s:1> GATA-6wt <s:1> BrdU <s:1> 95% inhibition of <s:1> た た. P53 - / - マ ウ ス line d bud cells で は GATA - 6 wt を take り 込 ん だ cells に p21 の strong い 発 を now recognize め, ま た p21 の promoter は GATA - 6 wt に よ り activeness さ れ た. さ ら に p21 - / - マ ウ ス line d bud cells に お い て は, GATA - 6 wt の BrdU take り 込 み 37% inhibition は weak く の inhibit で あ っ た. Conclusion: vascular smooth muscle に 発 now さ れ る GATA planning write factor の main な isoform は GATA - 6 で あ り, vascular smooth muscle cell に お い て before turning に 発 now さ れ た GATA - 6 は の S cell cycle phase to を し, こ の role less の な く と も a は p53 を interface さ な い p21 の 発 now rights に よ が る thing Instigated された.

项目成果

Ikenouchi H, Hirata Y: "Negative Inotropic Effect of Adrenomedullin in Isolated Adult Rabbit Cardiac Ventricular Myocytes" Circulation. 95. 2318-2324 (1997)

Ikenouchi H、Hirata Y：“肾上腺髓质素对离体成年兔心室肌细胞的负性肌力作用”循环。

Bremer V, Hirata Y: "Role of nitric oxide in rat nephrotoxic nephritis : Comparison between inducible and constitutive nitric oxide synthase" J Am Soc Nephrol. 8. 1712-1721 (1997)

Bremer V、Hirata Y：“一氧化氮在大鼠肾毒性肾炎中的作用：诱导型和组成型一氧化氮合酶之间的比较”J Am Soc Nephrol。

Hirata Y他: "Receptor subtype for vasopressin-induced release of nitric oxide from rat kidney" Hypertension. 29. 58-64 (1997)

Hirata Y 等人：“加压素诱导大鼠肾脏释放一氧化氮的受体亚型”高血压。 29. 58-64 (1997)

Matsumoto A, Hirata Y: "Inhaled nitric oxide and exercise capacity in congestive heart failure" Lancet. 349. 999-1000 (1997)

Matsumoto A、Hirata Y：“吸入一氧化氮和充血性心力衰竭的运动能力”《柳叶刀》。

Kojima H, Hirata Y: "Development of fluorescent indicator for the bioimaging of nitric oxide" Biol Pharma Bull. 20. 1229-1232 (1997)

Kojima H、Hirata Y：“一氧化氮生物成像荧光指示剂的开发”Biol Pharma Bull。