C-typeナトリウム利尿ペプチドの腎臓における発現調節ならびに病態生理学的意義の検討

C型利尿钠肽在肾脏中表达调控及病理生理意义的研究

• 批准号: 05670948
• 负责人: 平田 恭信
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670948/
• 关键词: ANP; BNP; CNP; rat; kidney; mRNA; radioimmunoassay

【目的】C-type Na利尿ペプチド(CNP)は近年ブタ脳から単離、同定された新しいNa利尿ペプチドであるが、発見当初よりその存在は中枢神経系に限局すると報告され、心房性Na利尿ペプチド(ANP)および脳性Na利尿ペプチド(BNP)とは異なり、心臓には存在せず、また血中を循環しない。しかし、最近CNPが培養macrophageあるいは血管内皮細胞でも産生されることが明らかになり、このことはCNPがlocal mediatorとして機能している可能性を示唆している。本研究ではNa利尿ペプチドの主要な標的臓器である腎臓におけるNa利尿ペプチドの産生の有無を検討した。【方法】Wistarラットの腎臓からペプチドを抽出し、さらにANP、BNP、CNPの含量を測定した。さらにそれらの分子型をゲル濾過ならびに逆相高速液体クロマトグラフィーにて検討した。ラット腎由来の培養細胞株であるNRK-52E細胞を用いてその培養液中へのCNPの分泌を測定した。ラット腎およびNRK-52E細胞中のANP、BNP、CNPmRNAをNorthern blot法および逆転写後にpolymerase chain reaction(PCR)で増幅して確認した。【結果】ラット腎のANP、CNP含量はそれぞれ2.56±0.19[SE]、0.47±0.02fmol/mg質重量であった。一方、BNPの免疫活性はまったく認めなかった。ANPの分子型は大部分が血中と同じα-ANP(1-28)であり、一方、CNPはpro体(分子量12K)およびCNP-53の型で存在していた。NRK-52E細胞は時間依存性にCNPを分泌した。またCNP mRNAが腎およびNRK-52E細胞で検出できたがANP mRNAは検出できなかった。【結語】Na利尿ペプチドの免疫活性は腎臓をはじめとする種々の組織で認められているが同部位での産生を確認した報告は少ない。本研究で認められた腎臓におけるANPの免疫活性は流血中のそれを反映したものであろう。しかしCNPはその前駆体さらにはmRNAの存在も確認できたことから尿細管をはじめとする腎細胞でCNPが産生されていると考えられる。従って、Na利尿ペプチドの内、腎臓で産生されるのはCNPのみであり、本ペプチドの局所因子としての役割が注目される。

【 Objective 】C-type Na diuresis ペ プ チ ド (CNP) は recent ブ タ 脳 か ら 単 from, with fixed さ れ た new し い Na diuresis ペ プ チ ド で あ る が, 発 see when よ り そ の は central 経 god exist に limit bureau す る と report さ れ, atrial Na diuresis ペ プ チ ド (ANP) お よ び 脳 sex Na diuresis ペ プ チ ド (BNP) と は different な り is crucial, the heart に は exist せ ず The を in the また blood circulates な また. し か し, recently CNP が cultivate macrophage あ る い は endothelial cells で も produce さ れ る こ と が Ming ら か に な り, こ の こ と は CNP が local mediator と し て function し て い を る possibility in stopping し て い る. This study で は Na diuresis ペ プ チ ド の main viscera で な mark あ る renal viscera に お け る Na diuresis ペ プ チ ド の produce の presence of を beg し 検 た. 【 method 】 Wistar ラ ッ ト の renal viscera か ら ペ プ チ ド を spare し, さ ら に ANP, BNP, CNP を の determination し た. Youdaoplaceholder0 さらにそれら molecular type をゲ た filter ならびに reverse phase high-speed liquid ロ ロ トグラフィ にて検 にて検 にて検 to make た た. Youdaoplaceholder0 renal cell line であるNRK-52E cells を the secretion of へ <s:1> CNP <e:1> in the <s:1> てそ <s:1> culture medium を was used to determine た. ラ ッ ト renal お よ び NRK - 52 e cells の ANP, BNP, CNPmRNA を Northern blot method お よ び inverse planning after write に polymerase chain reaction (PCR) で rights of し て confirm し た. 【 results 】 ラ ッ ト renal の ANP, the content of CNP は そ れ ぞ れ 2.56 + / - 0.19 (SE), 0.47 + / - 0.02 fmol/mg mass weight で あ っ た. One party, BNP <s:1> immune activity まったく まったく recognition めな った った. ANP の type molecular は most が blood と with じ alpha ANP (1-28) で あ り, one party, CNP は pro body (12 k) molecular weight お よ び CNP - 53 の で exist し て い た. NRK-52E cells に time-dependent にCNPを secrete た. ま た CNP mRNA が renal お よ び NRK cells - 52 e で 検 out で き た が ANP mRNA は 検 out で き な か っ た. [conclusion] the Na diuresis ペ プ チ ド の immunocompetence は renal viscera を は じ め と す る kind 々 で の organization to recognize め ら れ て い る が with parts で の produce を confirm し た report less は な い. This study で acknowledges that the <s:1> immune activity of the められた renal におけるANP is reflected in the <s:1> それを during bleeding, which is in the form of an <s:1> た であろう and であろう であろう であろう. し か し CNP は そ の 駆 body before さ ら に は mRNA の exist も confirm で き た こ と か ら urine tube を は じ め と す る renal cell で CNP が produce さ れ て い る と exam え ら れ る. 従 っ て, Na diuresis ペ プ チ ド の is crucial, kidney で in さ れ る の は CNP の み で あ り, this ペ プ チ ド の bureau factor と し て cut が の service attention さ れ る.

项目成果

Yasunobu Hirata: "Variable effects of endothelin-1 on [Ca^<2+>]:transients,pH:and contraction in ventricular myocytes." Am J Physiol. 265. H793-H800 (1993)

Yasunobu Hirata：“内皮素 1 对 [Ca^2>]：瞬态、pH：和心室肌细胞收缩的不同影响。”

Yasunobu Hirata: "Does endothelin work as an internal mechanisms to alter pressure natriuresis in spontaneously hypertensive rats?" J Hypertens. (in press).

Yasunobu Hirata：“内皮素是否作为改变自发性高血压大鼠压力尿钠的内部机制起作用？”

Yasunobu Hirata: "Real-time measurement of nitric oxide produced ex vivo by by luminol-H_2O_2 chemiluminescence method." J Biol Chem. 268. 23106-23110 (1993)

Yasunobu Hirata：“通过鲁米诺-H_2O_2化学发光法实时测量离体产生的一氧化氮。”

Yasunobu Hirata: "Role of endogenous ANP in DOCA-salt hypertensive rats:effects of a novel non-peptide antagonist for ANP receptor." Circulation. 87. 554-561 (1993)

Yasunobu Hirata：“内源性 ANP 在 DOCA 盐高血压大鼠中的作用：新型非肽拮抗剂对 ANP 受体的作用。”

Yasunobu Hirata: "Detection of nitric oxide production from perfused organ by luminol-H_2O_2 system." Anal Chem. 65. 1794-1799 (1993)

Yasunobu Hirata：“通过鲁米诺-H_2O_2 系统检测灌注器官中一氧化氮的产生。”