血管平滑筋細胞の分化に関与する平滑筋特異的スプライシング因子の同定

鉴定参与血管平滑肌细胞分化的平滑肌特异性剪接因子

• 批准号: 09281229
• 负责人: 平野 勝也
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09281229/
• 关键词: 血管平滑筋細胞; 形質転換; 動脈硬化; α-トロポミオシン; スプライシング; プロテインキナーゼC; 蛋白質リン酸化

本研究は、平滑筋特異的スプライシング因子を同定するために、培養平滑筋細胞を用いて、平滑筋細胞の形質変換に伴うトロポミオシンのアイソフォームの変換調節機構を明らかにすることを目的として行った。培養細胞には、ラット大動脈平滑筋細胞の初代培養を用いた。10%胎児牛血清を含む培地で培養し、コンフルエントに達した細胞を無血清培地で2日間培養して、実験に用いた。α-トロポミオシンアイソフォーム発現の解析は、逆転写-PCRにより行った。ラットα-トロポミオシンのエクソン1、2、3、4に特異的なプライマーを作製し、平滑筋細胞から精製した総RNAを1μg用い、RT-PCRによりトロポミオシン発現を解析した。1.無血清培地で培養した平滑筋細胞を、再び血清で刺激すると1.5時間以内に、エクソン3を含む非平滑筋型アイソフォームの発現が増加した。エクソン1、エクソン2の発現は変化しなかった。血清濃度1%から増強作用が認められ、3%で最大効果に達し、エクソン3の発現は刺激前の約2倍になった。2.血清によるエクソン3の発現増強は、1-10μM H-7の前処理により完全に抑制された。wortmanninは、0.1μMの濃度において、不完全な抑制作用を示した。3.フォルボール12,13ジブチレートで平滑筋を刺激すると、エクソン3の発現が増加した。1nMから増強作用が認められ、100nMで最大効果に達し、エクソン3の発現は刺激前の約2倍に達した。以上より、血管平滑筋細胞の増殖刺激を行うと、非平滑筋型αトロポミオシンの発現が増強し、その増強には蛋白質リン酸化反応が重要な役割を果たすことが明らかとなった。トロポミオシンpre-mRNAスプライシングの調節にプロテインキナーゼCが関与することが示唆された。

In this study, smooth muscle specific factors were identified and used to culture smooth muscle cells, and smooth muscle cells were transformed into smooth muscle cells. The primary culture of cultured cells and smooth muscle cells was used. 10% fetal bovine serum was added to the culture medium, and the cells were cultured in serum-free medium for 2 days. Analysis of alpha-and reverse transcription-PCR reactionsα-PCR analysis of 1, 2, 3, 4-specific RNA production, smooth muscle cell purification, 1μg RNA production, RT-PCR analysis of 1, 2, 3, 4-specific RNA production 1. Within 1.5 hours of culturing smooth muscle cells in serum-free medium and stimulating them with serum, the discovery of non-smooth muscle cells containing Exxon 3 increased.エクソン1、エクソン2の発现は変化しなかった。Serum concentrations of 1% and 3% increased the maximum effect, and the effect was about 2 times that before stimulation. 2. The expression of serum anti-virus 3 was enhanced and completely inhibited by pretreatment with 1-10μM H-7. Wortmannin showed incomplete inhibition at concentrations of 0.1μM. 3. The appearance of the smooth muscle is increased when the muscle is stimulated. 1nM increased the effect, 100nM increased the maximum effect, 3 nM increased the effect approximately twice as much as before stimulation. The growth of vascular smooth muscle cells was stimulated, and the development of non-smooth muscle cells was enhanced, and the protein acidification was enhanced, which was important for the development of vascular smooth muscle cells. The expression of pre-mRNA is related to the expression of pre-mRNA.

项目成果

Zhou,Y-B: "Expression and Function of α1-Adrenoceptor subtypes in the Porcine Renal Artery." European Journal of Pharmacology. 341. 95-103 (1998)

Zhou，Y-B：“猪肾动脉中 α1 肾上腺素受体亚型的表达和功能。欧洲药理学杂志”341. 95-103 (1998)。