p27^<Kip1>新規分子種の同定とがん抑制因子としての機能解明

p27^<Kip1>新分子种类的鉴定及其抑癌功能的阐明

• 批准号: 12213103
• 负责人: 平野 勝也
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213103/
• 关键词: 細胞周期; サイクリン依存性キナーゼ; p27^<Kip1>; アイソフォーム; 蛋白質分解

血管内皮細胞cDNAライブラリーからサイクリン依存性キナーゼ阻害蛋白質p27^<Kip1>の新規分子種をクローニングした。新規分子種は、従来種とは異なるC末端を有するスプライスアイソフォームである。細胞抽出液を用いた分解アッセイを行ったことろ、従来種は増殖期の細胞抽出液によって1時間以内に分解されたのに対し、新規分子種は抵抗性であった。このことから新規分子種を、p27^<Kip1R>(degradation-resistant isoform of p27^<Kip1>)と命名した。新規分子種を緑色蛍光色(GFP)との融合蛋白質として培養細胞に発現させると、従来種と同様に核へ局在することが明かとなった。GFP蛍光顕微鏡画像解析により核局在の程度を定量評価する方法を確立し、従来種の変異体を解析したところ、従来種の核移行シグナルは2分裂型であり、領域153〜166が核移行に必要最小限の領域であることを明らかにした。ところが、従来種と新規分子種の共通領域では核への特異的集積が消失した。このことから、新規分子種に特異的なC末端領域にも核移行に必要は配列があり、新規分子種の核移行シグナルも2分裂型であることが示唆された。GFP蛍光を指標に、フローサイトメーターを用いて、組換え蛋白質発現陽性及び陰性細胞の増殖を評価する方法を確立した。すなわち、遺伝子導入後各時点で、総細胞数を計測し、発現陽性細胞の割合を求め、両者から発現陽性及び陰性細胞の細胞数を算出し、増殖の時間経過を評価した。ヒト子宮頚癌由来HeLa細胞に新規分子種を発現させると、従来種同様、G_1期からS期への移行を阻害し、がん細胞の細胞増殖を完全に停止させた。さらに、新規分子種を発現する細胞の^<**>%の細胞にアポトーシスを誘導した。試験管内の実験から新規分子種はがん抑制因子としての機能を果たすことが示唆された。

The vascular endothelial cell cDNA protein (p27), which is a novel molecular species of lt;Kip1>, is dependent on vascular endothelial cell growth cycle. In the new regulations, there are many kinds of drugs at the end of the C terminal. The cell extraction fluid was used to decompose the cell extract, the cell extract from the reproductive period, the cell extract from the cell, and the molecular resistance test within one hour. Please name the new rule molecule, p27 ^ & lt;Kip1R> (degradation-resistant isoform of p27 ^ & lt;Kip1>). The new molecule, color, light color (GFP), fusion protein, fusion protein, cell culture, fusion protein, light color, light color, light color GFP photoluminescence micro-image analysis. The Nuclear Bureau is responsible for the establishment of quantitative analysis methods, for the analysis of nuclear transfer devices, for the separation of nuclear transfer devices, and for the minimum necessary limits for nuclear transfer in the field of 153-166 nuclear transfer. The collection of nuclear weapons in the common field of new regulations and molecular species has disappeared. The C-terminal domain of the new regulation molecule, the C-terminal domain of the new regulation molecule, the necessary configuration of the new regulation molecule, the nuclear migration unit of the new regulation molecule, the nuclear migration unit of the new regulation molecule, the nuclear migration unit of the new regulation molecule, the C-terminal domain of the new regulation molecule, the C-terminal domain of the new regulation molecule, the C-terminal domain of the new regulation molecule, the nuclear migration unit of the new regulation molecule, the nuclear migration unit of the new regulation molecule, the C-terminal domain of the new regulation molecule, the C-terminal domain and the nuclear migration of the new regulation molecule. GFP was used to determine the accuracy of the cell culture method, such as the use of DNA, tissue protein, tissue, protein, and so on. Cell count, cell count and colony time were calculated. The cause of HeLa cancer is that the new molecular markers show that there are many diseases, that there are some identical genes, that the G _ 1

项目成果

Zeng Y,Hirano K,Hirano M,Nishimura J,Kanaide H: "Minimal requirement for nuclear localization of p27^<Kip1>, a cyclin-dependent kinase inhibitor."Biochemical and Biophysical Research Communications. 274. 37-42 (2000)

Zeng Y、Hirano K、Hirano M、Nishimura J、Kanaide H：“细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p27^<Kip1> 核定位的最低要求。”生物化学和生物物理研究通讯。

Toshima J,Hirano K,Nishimura J,Nakano H,Kanaide H: "Differential effects of progesterone and 17β-estradiol on the Ca^<2+> entry induced by thapsigargin and endothelin-1 in in situ endothelial cells."Biochimica et Biophysica Acta. 1499. 109-121 (2000)

Toshima J、Hirano K、Nishimura J、Nakano H、Kanaide H：“黄体酮和 17β-雌二醇对原位内皮细胞中毒胡萝卜素和内皮素-1 诱导的 Ca^2+ 进入的不同影响。”Biochimica et Biophysicala法案。1499。109-121（2000）

Morisaki T,Matsunaga H,Beppu K,Ihara E,Hirano K,Kanaide H, et al: "A combination of cyclosporin-A (CsA) and interferon-gamma (IFN-γ) induces apoptosis in human gastric carcinoma cells."Anticancer Research. 20. 3363-3374 (2000)

Morisaki T、Matsunaga H、Beppu K、Ihara E、Hirano K、Kanaide H 等人：“环孢素 A (CsA) 和干扰素-γ (IFN-γ) 的组合可诱导人胃癌细胞凋亡。”研究。20。3363-3374（2000）

Hirano K,Hirano M,Zeng Y,Nishimura J,Kanaide H: "Cloning and functional expression of a degradation-resistant novel isoform of p27^<Kip1>."Biochemical Journal. 353. 51-57 (2001)

Hirano K、Hirano M、Zeng Y、Nishimura J、Kanaide H：“p27^<Kip1> 的抗降解新型亚型的克隆和功能表达。”生化杂志。

Hirano K,Hirano M.Eto W,Nishimura J,Kanaide H: "Mitogen-induced upregulation of non-smooth muscle isoform of α-tropomyosin in rat aortic smooth muscle cells."European Journal of Pharmacology. 406. 209-218 (2000)

Hirano K、Hirano M.Eto W、Nishimura J、Kanaide H：“丝裂原诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞中 α-原肌球蛋白非平滑肌亚型的上调。”欧洲药理学杂志 406。209-218（2000 年） ）