p27^<Kip1>新規分子種の同定とがん抑制因子としての機能解明

p27^<Kip1>新分子种类的鉴定及其抑癌功能的阐明

• 批准号: 13214077
• 负责人: 平野 勝也
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214077/
• 关键词: 細胞周期; サイクリン依存性キナーゼ; p27^<Kip1>; アイソフォーム; 蛋白質分解; プロテアソーム; HeLa細胞; 血管内皮細胞

正常細胞の増殖制御において最も重要で、生理的な役割を果たす細胞間接触による増殖停止に関して、そのメカニズムを明らかにするために、培養ブタ大動脈内皮細胞を用いてp27^<Kip1>の発現調節機構を明らかにした。内皮細胞を低密度(コンフルエント密度の25%)及び高密度(80%)の二つの異なる密度で植え付け、異なる時間経過で細胞同士の接触による増殖停止を誘導することにより、p27^<Kip1>蛋白質の発現変化と細胞周期進行との時間的相関を明らかにした。静止期の細胞を植え付け直すと、25%及び80%植え付け共に細胞は同調してS期に入り、20時間後にS期のピークに達した。その後、25%植え付けの場合は96時間後に、80%植え付けの場合は48時間後に細胞周期から外れた。核におけるp27^<Kip1>蛋白質の発現は、細胞周期に入る際に消失し、再び静止期に戻る際に回復した。このp27^<Kip1>蛋白質の発現変化は、Kip1 mRNAの発現変化を伴った。p27^<Kip1>蛋白質の分解活性は、細胞周期に入る際に増加したり、細胞周期から外れる際に低下することはなかった。Kip1 mRNAの安定性は増殖期に低下し、細胞周期から外れる時期及びコンフルエント(静止期)の時期に上昇した。Nuclear run-on assayによりKip1遺伝子の転写活性はKip1 mRNAの発現レベルと関連することが明らかとなった。以上のことから、細胞同士の接触はKip1遺伝子の転写を亢進させ、またKip1 mRNAの安定性を上昇させる。これにより、p27^<Kip1>蛋白質の発現が増加し、細胞間接触による増殖停止を引き起こすと考えられた。さらに、分解抵抗性アイソフォームは、その強制発現により、子宮頚ガン由来HeLa細胞の細胞周期進行を主にG1期で停止させ、増殖を強く抑制することを明らかにした。新規アイソフォームは、従来種とは異なる核移行シグナルを有し、核に局在することを明らかにした。新規アイソフォームと従来種の発現分布は臓器組織により異なることを明らかにした。

The most important thing is to control the proliferation of normal cells, and the physiological contact between cells is to stop the proliferation of cells.ムを明らかにするために、cultivated aortic endothelial cells を いてp27^<Kip1>の発existing regulatory mechanism を明らかにした. Endothelial cells are low-density (25%) and high-density (80%), and are of different density and density. There is a correlation between contact and proliferation cessation, induction of p27^<Kip1> protein, and cell cycle progression and timing. The cells in the stationary phase are transplanted and straight, the cells in the 25% and 80% transplanted phases are synchronized, the S phase is in, and the S phase is in after 20 hours. After 25% of the time, 25% of the time will be released after 96 hours, and 80% of the time will be released after 48 hours. The nucleus appears and the protein appears, the cell cycle enters and disappears, and the resting phase resumes.このp27^<Kip1>The protein has been changed, and the Kip1 mRNA has been changed. p27^<Kip1>Protein decomposition activity is low, the cell cycle is low and the cell cycle is high, and the cell cycle is low and the cell cycle is low. The stability of Kip1 mRNA is lowered during the proliferative phase, higher during the outer phase of the cell cycle, and higher during the resting phase. Nuclear run-on assay shows that Kip1 is active and Kip1 mRNA is active. The above results show that the contact between the cells and the cells has increased, and the stability of Kip1 mRNA has increased.これにより, p27^<Kip1>Protein の発appears がincrease し, cell-to-cell contact によるproliferation cessation をinduced こすと卡えられた. HeLa The progress of the cell cycle is mainly due to the G1 phase, which is stopped, and the proliferation is inhibited, which is the reason why the cell cycle is bright and clear. The new rules are as follows: The new regulations are the same as those of the new ones.

项目成果

Ichiki T, Hirano K, Kanaide H, Takeshita A (他5名, 7位): "Downregulation of angiotensin II type 1 receptor by hydrophobic 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitors in vascular smooth muscle cells"Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Bio

Ichiki T、Hirano K、Kanaide H、Takeshita A（其他 5 名，第 7 名）：“血管平滑肌细胞中疏水性 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶 A 还原酶抑制剂对血管紧张素 II 1 型受体的下调”动脉硬化、血栓形成和血管生物

Hirano M, Hirano K, Nishimura J, Kanaide H: "Transcriptional Up-regulation of p27^<Kip1> during Contact-Induced Growth Arrest in Vascular Endothelial Cells"Experimental Cell Research. 271. 356-367 (2001)

Hirano M、Hirano K、Nishimura J、Kanaide H：“血管内皮细胞接触诱导生长停滞期间 p27^<Kip1> 的转录上调”实验细胞研究。

Hirano K, Hirano M, Zeng Y, Nishimura J, Hara K, Muta K, Nawata H, Kanaide H: "Cloning and functional expression of a degradation-resistant novel isoform of p27^<Kip1>"Biochemical Journal. 353. 51-57 (2001)

Hirano K、Hirano M、Zeng Y、Nishimura J、Hara K、Muta K、Nawata H、Kanaide H：“p27^<Kip1> 的抗降解新型亚型的克隆和功能表达”生化杂志。

Muranyi A, Zhang R, Liu F, Hirano K (他3名, 4位): "Myotonic dystrophy protein kinase phosphorylates the myosin phosphatase targeting subunit and inhibits myosin phosphatase activity"FEBS Letter. 493. 80-84 (2001)

Muranyi A、Zhang R、Liu F、Hirano K（其他 3 名，第 4 名）：“强直性营养不良蛋白激酶磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基并抑制肌球蛋白磷酸酶活性”FEBS Letter. 493. 80-84 (2001)。