Eine erste MAS-NMR-Struktur eines Membranproteins: Die Struktur von OmpG und die Dynamik der Porenöffnung in nativer Lipidumgebung

膜蛋白的第一个 MAS-NMR 结构：OmpG 的结构和天然脂质环境中孔打开的动力学

• 批准号: 47468893
• 负责人: Professor Dr. Hartmut Oschkinat
• 金额: --
• 依托单位: Leibniz-Forschungsinstitut für Molekulare Pharmakologie (FMP)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2006-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/47468893?language=en
• 关键词: Eine; erste; MAS; NMR; Struktur

Es ist bislang noch nicht gelungen, die Struktur eines integrierten Membranproteins mittels MAS-NMR zu bestimmen. Der vorliegende Antrag soll dazu dienen, ein bereits gut fortgeschrittenes Projekt, die Strukturbestimmung des Aussenmembranproteins von E. coli (Outermembrane protein G, OmpG) in nativer Lipidumgebung unter Verwendung von Proben mit verschiedenen Markierungsmustern und neuen NMR-spektroskopischen Methoden zu Ende zu bringen. In diesem Rahmen sollen speziell markierte Aminosäuren eingesetzt werden, um Aminosäure-selektiv markierte Proben herzustellen, und Ligationstechniken zur Herstellung von Segment-markierten OmpG-Praparationen. Weiterhin sollen deuterierte Proben hergestellt werden, die aus 10 % H2O/90 % D2O zurückgefaltet werden, um auf diese Weise Protonen- NMR-Spektroskopie im Festkörper durchzuführen und zur AuflÖsungsSteigerung Protonenfrequenzen benutzen zu können. Diese kürzlich in unserem Institut von der Gruppe von Bernd Reif vorgeschlagenen Experimente wurden bereits an mikrokristallinen Probe einer SH3 Domäne getestet und erlauben, ein der Lösungs-NMR-Spektroskopie analoges Strukturbestimmungskonzept anzuwenden. In einer rÖntgenkristallographischen Untersuchung wurde OmpG als eine durch pH-Änderung schaltbare Pore für Disaccharide charakterisiert. Hier sollen Untersuchungen bei unterschiedlichen pH-Werten in nativen Lipiddoppelschichten durchgeführt werden, um die Dynamik des Öffinmgsvorgangs und die Bindungseigenschaften gegenüber Zuckern und anderen kleinen Molekülen besser beschreiben zu können, und nützliche Informationen für das Design von biotechnologisch einsetzbaren Poren zu liefern.

目前还不能确定，这种结构是一种用MAS-NMR测定的完整的膜蛋白。本研究旨在通过对E.大肠杆菌外膜蛋白G（Outermembrane protein G，OmpG）在天然脂质体中的表达。在这种情况下，必须对氨基进行特殊标记，然后进行韦尔登选择性标记，并采用连接技术对OmpG-制备片段进行标记。此外，由于10% H2O/90% D2 O的混合物韦尔登韦尔登，因此可在Festkörper上通过该质子-NMR光谱仪进行测量，并通过AuflÖsungsSteigerung质子频率测量进行校正。在Bernd Reif实验组的研究所中，该实验室将使用一种用于SH 3 Domäne测试和测试的微晶体探针，该探针类似于Lösungs-NMR-Spektroskopie结构。在一个RÖntgenkristallographischen Untersuchung wurde OmpG als eine durch pH-nderung schaltbare Pore für Disaccharacterisiert.在天然脂质韦尔登中，通过对pH值的非恒定测量，可以确定生物活性物质的动力学和与Zuckern和其他小分子的结合，并为生物技术的设计提供新的信息。