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マウスES細胞由来肝細胞の新規分化誘導法の確立および細胞移植における有用性の検討

小鼠ES细胞来源肝细胞新分化诱导方法的建立及其在细胞移植中的有效性

基本信息

批准号：
17591394
负责人：
藤井英明
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17591394/
关键词：
ES細胞肝幹細胞細胞移植治療

项目摘要

本研究の目的はin vitroでES細胞から肝細胞を分化誘導し、これを細胞移植医療に利用することで難治性肝疾患に対する新たな治療方法を確立することである。このため、本年度は(1)遺伝子改変マウスES細胞株の作成及びマウスES細胞由来内胚葉系細胞の分離法の確立と(2)その細胞の成熟肝細胞へのin vitro分化誘導法の確立を目指して研究を行った。具体的には、マウスalpha-fetoprotein(AFP)の転写調節領域をクローニングした後に、Hygromycin耐性遺伝子とEnhanced Green Fluorescent Protein(EGFP)遺伝子を持つプラスミド(pHyg-EGFP)に組み替えて遺伝子改変プラスミドベクターを作製した。次いでこのプラスミドベクターがgenomic integrationしたマウスES細胞をneomycin耐性という特性を用いて分離獲得し、ES細胞由来AFP遺伝子発現細胞を緑色蛍光発現細胞として認識できることを確認した。作製したトランスジェニックES細胞は分化誘導条件の至適化を行い、さらに蛍光励起セルソーターを用いてEGFP発現細胞を単離することで、EGFP発現(すなわちAFP発現)未分化内胚葉細胞の単離方法を確立した。次に、これまで我々が確立したマウス胎仔肝前駆細胞の成熟肝細胞への分化誘導法を利用することで、単離したマウスES細胞由来内胚葉系細胞から成熟肝細胞への分化誘導を、アンモニア代謝能、アルブミン合成能、グリコーゲン蓄積などの各肝細胞機能を用いて検討した。以上の結果により、マウスES細胞由来内胚葉系細胞の分離法と成熟肝細胞へのin vitro分化誘導法を確立し、論文掲載・発表を行った。次年度以降は、本年度に得られたマウスES細胞由来内胚葉系細胞の致死的肝障害モデルマウスへの細胞移植を用いて、この細胞の疾患モデルにおける有用性を検討する予定であり、現在実験モデルの作成を行っている。

The aim of this study is to establish new therapeutic methods for refractory liver diseases by inducing differentiation of ES cells in vitro and using them in cell transplantation therapy. This year, we conducted research on (1) establishment of ES cell lines and ES cell origin endoblast line isolation method, and (2) establishment of mature hepatocytes in vitro differentiation induction method. Specifically, alpha-fetoprotein(AFP) gene expression regulatory domain is regulated by pHyg-EGFP gene expression, Hygromycin resistant gene expression and Enhanced Green Fluorescent Protein(EGFP) gene expression. The characteristics of ES cell neomycin tolerance were obtained by isolation, and the origin of ES cell AFP gene was identified as green fluorescent cell. To establish the isolation method of undifferentiated endoblast cells, the optimal conditions for differentiation induction of ES cells were established. The method for differentiation induction of mature hepatocytes derived from embryonic stem cells was established. The functions of mature hepatocytes derived from embryonic stem cells were investigated. The above results are presented in this paper. The method of isolation of ES cells from endoblast line and the method of induction of mature hepatocytes from vitro differentiation are established. In the following year, the ES cells obtained in this year are derived from endodermal cells, and the liver damage caused by endodermal cells is discussed.