カスケ-ド型増幅機能を有する生物機能性膜の開発とその応用

具有级联放大功能的生物功能膜的研制及其应用

• 批准号: 01604523
• 负责人: 軽部 征夫
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01604523/
• 关键词: カスケ-ド増幅; 血球凝固系; 合成発色基質; B型肝炎ウィルス表面抗原; 高感度センサ-; 免疫測定; バイオセンサ-

昨年度までにリポポリサッカライド(LBS)と標識剤、カブトガニ血球中のカスケ-ド反応を検出系に用いた免疫測定法をゲル化反応を指標として行ってきたが、感度的には充分ではなかった。そこで本年度は天然基質コアグロ-ゲンを合成発色基質と置き換え、固相のLPS活性を光学的に測定して免疫測定を行った。抗IgGをポリスチレンビ-ズに吸着固定化し、これに対してIgGとLPS標識IgGを競合的に反応させ、反応終了後、上澄み液を発色基質-LPS-LAL系に添加した。また、ビ-ズを洗浄し末反応のLPS標識IgGを洗い流したのち、ビ-ズを発色基質-LPS-LAL系に添加した。その結果、IgGを0.5×10^<-11>〜を0.5×10^<-7>g・ml^<-1>の範囲で測定できることが明らかとなった。また、IgG固体化ポリスチレンビ-ズに対し、抗IgGとLPS標識抗IgGとを競合的に反応させ、反応終了後、ビ-ズを劣浄し、これを発色基質LPS-LAL系に添加したところ、10^<-11>〜10^<-7>g・ml^<-1>の範囲で抗IgGの測定が可能であり高感度化を図ることができた。さらに、本システムをサンドイッチ型免疫分析に組み込むことにより、臨床検査において高感度測定が要望されているB型肝炎ウイルス表面抗原(HBs)の高感度測定を試みた。まず、固相に吸着した抗HBs抗体に対してLPSを反応させた。未反応のHBsを洗い流した後、固相のHBsに対してLPS標識抗HBs抗体を反応させた。未反応のLPS標識抗HBs抗体を洗浄により除去した後、固相を発色基質-LPS-LAL系に加えた。その結果、HBsを10^<-12>〜10^<-10>g・ml^<-1>と極めて高円度に測定できた。

In the past year, the identification, identification and detection of anti-inflammatory substances in blood cells were carried out by immunoassay, and the detection and detection of anti-inflammatory substances were carried out by immunoassay. This year, we conducted an optical immunoassay for natural matrix, synthetic matrix and LPS activity. Anti-IgG binding agent, LPS binding agent, IgG binding agent, LPS binding agent, LPS binding agent, LPS-LAL system was added to the LPS-LAL system. Results: IgG 0.5×10^<-11>~ 0.5×10^<-7>g·ml <-1>^ IgG solid-state detection, anti-IgG detection, anti-LPS detection, anti-IgG <-11><-7>detection, anti-LPS detection, anti-IgG detection, anti-LPS detection, <-1>anti-IgG detection In addition, this study focused on the detection of hepatitis B virus surface antigen (HBs) by immunoassays. Anti-HBs antibodies are adsorbed on the solid phase of the cell. After the HBs were washed out, the HBs were washed out and the LPS was used to identify the anti-HBs antibody. After removal of anti-HBs antibody labeled with LPS, solid phase chromogenic matrix-LPS LAL system was added. Results, HBs, 10^<-12>~ 10^<-10>g·ml^<-1>and extremely high temperature measurement

项目成果

I.Karube and E.Tamiya(分担執筆): "Frontiers in Bioprocessing" CRC Press,Inc.,Florida, 456 (1990)

I. Karube 和 E. Tamiya（合著者）：“生物加工前沿” CRC Press, Inc., Florida, 456 (1990)

Muramatsu, H., Tamiya, E., Suzuki, M., Karube, I.: "Viscosity Monitoring with a Piezoelectric Quarts Crystal and Its Application to Determination of Endotoxin by Gelation of Limulus Amebocyte Lysate" Analytica Chimica Acta, 215 91-98, 1988.

Muramatsu, H.、Tamiya, E.、Suzuki, M.、Karube, I.：“使用压电石英晶体进行粘度监测及其在通过鲎变形细胞裂解物凝胶化测定内毒素中的应用”分析化学学报，215 91-98

Seki,A.,Tamiya,E.,Karube,I.: "Amplification immunoassay for the determination of Hepatitis B surface antigen" Applied Biochemistry and Biotechnology.

Seki，A.，Tamiya，E.，Karube，I.：“用于测定乙型肝炎表面抗原的扩增免疫测定”应用生物化学和生物技术。

Muramatsu,H.,Tamiya,E.,Karube,I.: "Piezoelectnic Crystal Viscosity Sensor:Application to Endotoxin Detrmination" Proc.of the MRS International Meeting on Advanced Materials. 14. 221-227 (1989)

Muramatsu,H.、Tamiya,E.、Karube,I.：“压电晶体粘度传感器：在内毒素测定中的应用”，MRS 国际先进材料会议记录。

Seki,A.,Tamiya,E.,Karube,I.: "A novel immunoassay based on cascade amplification system using lipoloysaccharide as label compound" Analytica Letters.

Seki,A.、Tamiya,E.、Karube,I.：“一种基于级联放大系统、使用脂多糖作为标记化合物的新型免疫测定法”Analytica Letters。