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DNAセンシングシステムの開発

DNA传感系统的开发

基本信息

批准号：
03205022
负责人：
軽部征夫
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03205022/
关键词：
遺伝子検出蛍光偏光解消ハイブリダイゼ-ション DNAプロ-ブ PCR DNA診断

项目摘要

本研究ではまず蛍光偏光解消を応用したDNAの検知システムについて検討した。すなわち、蛍光物質を標識したプロ-ブDNAとハイブリダイズした後の蛍光物質は、回転運動などの運動モ-ドが大きく異なる。したがって偏光解消度を指標としてハイブリダイズしたDNAの量を推定することが可能と考えられた。まずハイブリダイゼ-ションの過程でどのように偏光度が変化していくかを調べた。その結果、偏光解消は時間とともに増加していき、しだい定常値に達することがわかった。この変化はハイブリダイゼ-ションの進行度を示している。いま、タ-ゲットとなるDNAとして、pBR322プラスミドDNAを540bp断片中の3個あるいは6個のシトシンをチミンに変化させた試料を用いて、これにプロ-ブDNAを作用させ、ハイブリダイゼ-ションの時間経過を調べた。その結果、ミスマッチの塩基数が増加することにつれ、蛍光解消度の増加率が小さいことが明かになった。 PCR増幅反応は、超微量のDNAを検出するきわめて有効な方法である。そこで蛍光偏光解消法をPCR増幅反応に適用した。まず、16merのオリゴマ-にFITCを標識したDNAプロ-ブを合成し、タ-ゲットDNAとしてpUC119プラスミドを用い、遺伝病の診断を考え、200bpから1kbpまでの範囲を選んだ。PCR増幅回数を5回より30回まで5回おきに測定したところ、5回以降蛍光偏光異方度が上昇していることが判った。これは、FITCで標識されたDNAプロ-ブがPCR増幅反応の進行にともなって、16merから目的の長さの2本鎖DNAへと伸長し、FITCの動的挙動が変化したことを示すと考えられた。またPCR増幅の初期の段階でより迅速に、タ-ゲットDNAの存在を確認できることも示された。さらに測定温度を高くすると偏光異方度が下がることもわかった。これは、溶液の粘度変化が反映しているものと考えられた。

This study aims to explore the application of optical polarization in DNA detection. The light substance is identified by DNA and the light substance is moved back and forth. The amount of DNA is estimated. The polarization of the light beam is changed during the process of the light beam. The result is that the polarization resolution time increases and the constant value increases. The progress of this process is shown in the table below. Three of the 540bp fragments of pBR322 were identified by DNA sequencing. The six fragments of pBR322 were identified by DNA sequencing. As a result, the number of samples increased, and the rate of increase in the number of samples decreased. PCR amplification, ultra-micro DNA detection and detection This method of polarized light cancellation is applicable to PCR amplification. DNA synthesis, 16-mer DNA labeling, pUC119 DNA labeling, genetic disease diagnosis, 200bp DNA labeling, 1kbp DNA labeling. PCR amplitude increased by 5 cycles, 30 cycles by 5 cycles, and 5 cycles by 5 cycles. The PCR amplification was carried out in the presence of FITC and the target DNA was amplified in the presence of FITC. The early stages of PCR amplification were rapidly detected, and the presence of DNA was confirmed. The measurement temperature is high and the polarization is low. The viscosity of the solution changes.