カスケード型増幅機能を有する生物機能性膜の開発とその応用

具有级联放大功能的生物功能膜的研制及其应用

• 批准号: 63604530
• 负责人: 軽部 征夫
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63604530/
• 关键词: カスケード型増幅; 高感度センサー; バイオセンサー; 免疫測定; リポポリサッカライド

本研究ではカスケード型増幅反応システムを利用した新しい高感度測定法について検討した。特に、カスケード増幅反応システムとしてリポポリサッカライド(LPS)-カブトガニ血液凝固系に着目した。この反応系では、LPSがトリガーとなり、複数のプロテアーゼ前駆体がカスケード的に活性化され、最終的にコアギュリンケルを形成する。この増幅反応を利用するとピコグラムオーダーのLPSの検出が可能である。したがってLPS標識剤として用いれば新しい高感度免疫測定法が可能であると考えられる。LPS-IgC複合体はLPSにメタ過ヨウ素酸ナトリウムを加えた後、IgGと混合しNaBH_4溶液を加えることにより作製した。LPS、LPS標識IgGの活性は、水晶振動子、トキシノメーター(和光)、トキシカラー(生化学工業)を用いて測定した。抗IgGとの結合能力は二重拡散法を用いて測定した。イムノアッセイは抗IgGを吸着させたガラスビーズに、LPS標識IgGとIgGを競合的に反応させ、上澄のLPS活性を測定して行った。ゲルろ過でタンパク質と糖とが同時に検出された画分を凍結乾燥し、LPS標識IgGを得た。リンを定量し、IgGに結合したLPS量を測定したところ、IgG1分子に対して8分子程度のLPSが結合していることが示唆された。LPSの活性測定法に水晶振動子を用いた場合、10^<-12>g/mlの高感度の測定が可能であった。トキシノメーターを用いた場合、LPS標識IgGのLPS活性は高感度側では比較的遊離のLPSと良く一致したが、低濃度側では低下していた。抗IgGのLPS標識IgGに対する結合能力はIgGと比べると1/4に減少していた。次にトキシノメーターを用いてイムノアッセイを行ったところ10^<-9>〜10^<-8>g/mlの範囲でIgGの測定が可能であった。

In this study, we used a new method of high sensitivity measurement to investigate the effect of different types of amplification. The blood coagulation system is the most important part of the blood coagulation system. The reaction system is activated by LPS, and a plurality of precursors are formed by LPS. The amplitude of the reaction is increased by the increase in LPS detection. LPS identification is possible with a new high sensitivity immunoassay. LPS-IgC complex was prepared by adding LPS to NaBH_4 solution. LPS, LPS identification IgG activity, crystal oscillator, Triton (light), Triton (biochemical industry) Anti-IgG binding capacity was determined by the double diffusion method. The activity of LPS was determined by ELISA and ELISA. In addition, the LPS identification IgG can be obtained by freeze-drying. The amount of LPS bound to IgG was determined quantitatively, and the amount of LPS bound to IgG1 was determined quantitatively. LPS activity determination method for crystal vibrators in the use of high sensitivity, 10^<-12>g/ml determination is possible. The LPS activity of IgG was higher than that of free LPS and lower than that of free LPS. The binding capacity of anti-IgG and LPS labeled IgG was reduced by 1/4 compared with IgG. The measurement of IgG in the range of 10^<-9>~ 10^<-8>g/ml is possible.

项目成果

I.Karube: "Clinical Sensors Technology Vol.1" Kodansha, 195-208 (1988)

I.Karube：“临床传感器技术 Vol.1”讲谈社，195-208（1988）

I.karube: "Method in Enzymology Vol-137" Academic Press, 255-260 (1988)

I.karube：“酶学方法第 137 卷”学术出版社，255-260 (1988)

E.Tamiya et al.: Biosensor. 3. 139-146 (1988)

E. Tamiya 等人：生物传感器。

H.Muramatsu;et al.: Analytical Chemistry. 60. 2142-2146 (1988)

H.Muramatsu；等人：分析化学。

M.Gotoh et al.: J. Molecular Catalysis.

M.Gotoh 等人：J. 分子催化。