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DNAセンシングシステム開発

DNA传感系统开发

基本信息

批准号：
04205022
负责人：
軽部征夫
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04205022/
关键词：
DNAセンサーヒト染色体遺伝病 PCR 蛍光偏光解消法 PNA診断血液試料

项目摘要

特定のDNAの検出は,遺伝病や感染症などの発症前診断にきわめて有力である。しかし従来の方法では電気泳動やサザンハイブリダイゼーションなどの操作を必要とするため迅速な測定が困難であった。そこで本研究では,蛍光物質を修飾したDNAブローブを用いる蛍光偏光解消法に着目し,迅速で簡便なDNA検出システムを開発した。すなわち、蛍光偏光解消法とPCR反応を利用して、B/F分離を必要としない迅速で簡便な、そして極微量のDNAでも測定ができる新しいDNAの検出法の開発を目的とした。蛍光偏光解消法をDNA診断へ応用した例はほとんどなく、特にPCR反応に応用した例はまだない。そこでまず蛍光偏光解消法がPCR反応に応用できるかを検討した。そして、偏光異方度に彰響を与える種々の要因についても検討した。次に、実際の遺伝病や感染症の診断に応用することを考え、ヒト染色体をターゲットにした場合について検討した。まず白血球溶液を用いてHLA遺伝子の検出を行ったところ10回以上の反応回数で偏光異方度が上昇していくことがわかった。さらに,全血溶液1μ1を用いた場合についても同様に,10回以上で偏光異方度が上昇していることがわかった。次に男性の染色体には存在するが女性の染色体には存在しないY染色体上のSRY遺伝子をターゲットとして用いて実験を行った。その結果、男性血液を用いた場合には偏光異方度が上昇し、女性血液を用いた場合には変化がなかった。以上のことよりヒト染色体上の、特定な遺伝子の存在を1μ1という極めてわずかの血液試料を用い、蛍光偏光異方度を指標として検知することができることが示された。以上のように本研究は、蛍光偏光異方度を指標として、PCR法を用いて極微量の特定なDNAの検出をB/F分離なしで迅速で簡便に行える方法を開発したものであり、現在行われているDNA診断において、迅速かつ簡便な方法を提供したものであり分析化学や医療分析分野に与える波及効果はきわめて大きいと考えられる。

Specific DNA detection is effective in detecting infectious diseases and pre-diagnosis. It is difficult to determine the operation of the electric motor. In this study, we developed a rapid and simple method for DNA detection by using polarized light to modify DNA fragments. It is necessary to develop a rapid and simple method for the determination of DNA in fine particles by using polarization analysis and PCR. Polarization analysis is used in DNA diagnosis, especially in PCR. This method is used in PCR reaction. The main reason for this is that the polarization difference is obvious and obvious. In addition, in the diagnosis of infectious diseases and diseases, the examination of chromosomes should be carried out. The white blood cell solution is used to detect the polarization of HLA molecules. The polarization of HLA molecules is increased by more than 10 cycles. In addition, the whole blood solution 1μ1 is used in the same case, and more than 10 times, the polarization anisotropy increases. The SRY gene on the Y chromosome is present in the female chromosome. The result is that the polarization of male blood is increasing, while that of female blood is increasing. The presence of specific genes on chromosomes is an indicator of the use of blood samples and polarization anisotropy. In this study, we developed a rapid and simple method for DNA diagnosis by using PCR, a polarization anisotropy index, and a rapid and simple method for DNA analysis.