カスケード型増幅機能を有する生物機能性膜の開発とその応用

具有级联放大功能的生物功能膜的研制及其应用

• 批准号: 62604545
• 负责人: 軽部 征夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62604545/
• 关键词: カスケード増幅; 血液凝固系; 生物機能性膜; 高感度センサー; 水晶振動子; 免疫測定; バイオセンサー; 粘度測定

本研究ではカスケード増幅反応系としてカブトガニ血液凝固系を選択しこれを用いて増幅機能を有する生物素子を作製した. カブトガニ血液凝固系はリポポリサッカロイド(LPS)が初期因子として作用し, 連鎖的な反応を引き起こし最終的にコアギュローゲンのゲル化が進行する. この反応はカスケード的に著しく増幅されるため, 1ピコグラム/mlのLPSを検知することができる. この増幅反応を利用すれば, 特定の信号の増幅を行うことが可能と考えられる. そこで, LPSに抗体を結合した生物素子の作製を試みた. まずLPS懸濁液にNaIo_4を加え, 室温で1時間反応させ脱塩後, IgG溶液と反応させた. 次に0°CでNaBH_4溶液と2時間反応後, セファロースCL-4Bカラムでゲルロ過した. これによって得られた各フラクションをローリー法により蛋白質を, フェノールー硫酸法により糖を測定したところ, LPSとIgGの結合体と考えられるフランクションが得られた. このLPS-IgG 結合体のユアギユローゲンゲル凝固活性を調べたところ, 十分な活性を示すことが明らかとなった. またIgGに結合したLPSの量を測定したところ, IgG1分子に対して5分子程度のLPSが結合していることが示唆された. 次に作成した生物素子を測定する信号検索システムにつて検討した. すなわちコアギュローゲンのゲル化反応に伴う粘性の変化を連続的に測定するシステムとして水晶振動子に着目した. 水晶振動子の等価回路のパラメーターをインピーダンスアナライザー及びマイクロコンピューターによるデーター処理によって求めたところ, R_1が溶液の粘度によって変化することがわかった. そこで, 次にLPSによるゲル化反応を本システムを用いて測定した. その結果, 1ピュグラム/mlの高感度測定が可能であることが明らかとなった.

In this study, the amplification function of biotin was selected and controlled by the amplification function of biotin The blood coagulation system is divided into two groups: the initial factor (LPS) and the final factor (LPS). This is the first time I've ever seen an LPS detector. The amplitude of this signal is increased by the amplitude of the signal. In addition, LPS antibody binding to biotin was tested. After LPS suspension was diluted with NaIO_4, IgG solution was diluted with NaIO_4 at room temperature for 1 hour. After 2 hours of reaction in NaBH_4 solution at 0°C, CL-4B was recovered. The protein, LPS and IgG conjugates were determined by the protein and sulfuric acid methods. The LPS-IgG conjugate has been shown to modulate its coagulation activity. IgG binding to LPS was measured at five molecular levels and LPS binding to IgG was measured at five molecular levels. The next step is to create a biotin assay. This paper focuses on the measurement of the system and crystal vibrator that is connected to the change in viscosity of the crystal. The crystal vibration circuit is composed of two parts: one part is composed of two parts: In the case of LPS, it is necessary to determine the content of this article. As a result, the sensitivity of 1 μ g/ml was determined.

项目成果

Y.Kitagawa,E.Tamiya and I.Karube: Analytical Letters. 20. 81-96 (1987)

Y.Kitakawa、E.Tamiya 和 I.Karube：分析信件。

E.Tamiya,M.Gotoh,M.Tanaka,T.Matsui and I.Karube: Journal of Molecular Catalysis. 43. 293-301 (1988)

E.Tamiya、M.Gotoh、M.Tanaka、T.Matsui 和 I.Karube：分子催化杂志。

I.Karube and E.Tamiya: "Electrochemical Sensors in Immunological Analysis" Plenum Press (Edited by T.T.Ngo), 360 (1987)

I.Karube 和 E.Tamiya：“免疫分析中的电化学传感器”Plenum Press（T.T.Ngo 编辑），360 (1987)

H.Muramatsu,J.M.Dicks,E.Tamiya and I.Karube: Analytical Chemistry. 59. 2760-2763 (1987)

H.Muramatsu、J.M.Dicks、E.Tamiya 和 I.Karube：分析化学。

Y.Kitagawa,M.Ameyama,K.Nakashima,E.Tamiya and I.Karube: Analyst. 112. 1747-1749 (1987)

Y.Kitakawa、M.Ameyama、K.Nakashima、E.Tamiya 和 I.Karube：分析师。