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DNAセンシングシステムの開発

DNA传感系统的开发

基本信息

批准号：
02205024
负责人：
軽部征夫
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではまず蛍光偏光解消を応用したDNAの検知システムについて検討した。蛍光色素として、テトラメナルロ-ダミン、フルオレッセイン、およびエオシンンのそれぞれイソチオシアネ-ト誘導体(TRITC、FITC、EITC)を用いたDNAへの標識は、まずプロ-ブとなる一本鎖オリゴヌクレオチドの3'末端に、(NH_2ーdATP)あるいは、NH_2ーdVTPを重合させた。これを精製した後、先の蛍光色素を反応させることにより標識を行った。まずオリゴアデノシン(n=12ー18)を基質としてaminoーATPを重合させ、さらにFITCで標識した場合のTdTの反応時間に対する蛍光強度変化を調べたところ、反応時間の増加につれてaminoーATPの重合度が増し、標識された蛍光強度が増加した。次にこの標識したDNAをプロ-ブとして、相補鎖をもつポリチミジン(n=ca、240)との二本鎖形成後、偏光異方性の変化を調べた。その結果、各プロ-プともポリナミジンの添加により大きな偏光度が得られた。これは短い一本鎖プロ-ブDNAに標識された蛍光色素がサンプルDNAと相補的な二本鎖を形成し、これによって生じた回転ブラウン運動の緩和によるものと考えられた。次にハイブリダイゼ-ションの過程でどのように偏光度が変化していくかを調べた。その結果、偏光解消は時間とともに増加していき、しだい定常値に達することがわかった。いま、タ-ゲットとなるDNAとして、PBR322プラスミドDNAを540bp断片中の3個あるいは6個のシトシンをナミンに変化させた試料を用いて、これにプロ-ブDNAを作用させ、ハイブリダイゼ-ションの時間経過を調べた。その結果、ミスマッチの塩基数が増加することにつれ、蛍光解消度の増加率が小さいことが明かになった。

This study aims to explore the application of optical polarization in DNA detection. DNA labeling for chromophores, chromophores, and their combinations with the three leading molecules (TRITC, FITC, and EITC) was performed. The first step is to improve the quality of the product. In the case of matrix and amino ATP overlap, FITC marks the change of fluorescence intensity in response to TdT reflection time, and the increase of reflection time, and the increase of amino ATP overlap, and the increase of fluorescence intensity in response to FITC marks. After the formation of the second phase lock, the polarization anisotropy is modulated. As a result, the polarization of each film is increased. This is the first time that a chain of DNA fragments has been identified. It is the second time that a chain of DNA fragments has been identified. The polarization of the light beam is changed during the process. The result is that the polarization resolution time increases and the constant value increases. Three of the 540bp fragments of PBR322 DNA were found to have been isolated from the sample, and the effect of PBR322 DNA on the sample was investigated. As a result, the number of samples increased, and the rate of increase in the number of samples decreased.