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ショウジョウバエ培養細胞を用いた遺伝子導入による形質転換の研究

利用培养果蝇细胞进行基因转移转化的研究

基本信息

批准号：
01639510
负责人：
黒田行昭
金额：
$ 1.54万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

キイロショウジョウバエの伴性劣性突然変異は、睡腺染色体上の特定染色体にある特定遺伝子のバンドの欠損によって、胚発生の特定の時期に、特定の細胞や組織に形質分化や生理機能の障害が現れ、それによって個体死となるものが多い。本研究はこのようなキイロショウジョウバエの胚細胞の初代培養を使用して、遺伝子導入などの手法により、顕徴鏡下で細胞レベルでの検索が可能な遺伝子導入をして、細胞内に取り込まれた遺伝子の染色体への組込みや形質発現までの諸過程を分子レベルで解析するための系を確立することを目的としている。これまでの研究で、dor(deep orange:1F1-2A2)では、筋肉細胞の合胞体形成の障害が、野生型胚の抽出タンパク質によって回復され、dorの卵子が野生型の精子によって受精され、受精後5時間以降の胚抽出液が有効であり嚢胚形成期以降に精子の野生型DNAがタンパク質にまで翻訳され活性を発現していることが分った。本年度はさらにr(rudimentary:1-54.5)の致死胚の初代培養細胞を用いて、核酸合成経路にある種々の中間代謝物を各種濃度で培養液に添加して、rの胚細胞が示す上皮細胞のキチン質形成や成熟分化の欠損が、これら、添加した物質の細胞内への取込みによってどの程度回復されるかをしらべた。とくにピリミジン合成経路の代謝物質のなかでは、カ-バミルリン酸が10^<-3>Mの濃度で29%、カ-バミルアスパラギン酸が2.5×10^<-4>Mの濃度で60%、ジヒドロオロチン酸が2.5×10^<-4>M濃度で100%、さらにオロチン酸が2.5×10^<-4>Mの濃度で100%、rの胚細胞の初代培養で上皮細胞の成熟分化が回復されることが分った。このことはr致死胚の細胞では、ピリミジン合成径路のカ-バミルリン酸合成の前の段階で酵素の欠損があり、カ-バミルリン酸以降の代謝生成物の添加によって、正常の分化機能を回復することが明らかになった。

The sex difference of the chromosome is abrupt, the specific chromosome on the gland chromosome is abnormal, the specific gene is abnormal, the specific period of embryo development is abnormal, the specific cell and tissue are abnormal, the physiological function is abnormal, and the individual death is abnormal. The purpose of this study is to establish the molecular framework for the application of gene introduction techniques, microscopical approaches to gene expression in primary culture of embryonic cells, and to establish the molecular framework for the molecular analysis of the processes involved in gene expression and chromosome organization. In this study, dor(deep orange: 1F1 - 2A2) was found to be an obstacle to syncytial formation of muscle cells, a recovery of wild-type embryos, an fertilization of dor eggs from wild-type sperm, and an activation of wild-type DNA from reduced embryo extracts at 5 days after fertilization. This year, we added various concentrations of seed and intermediate metabolites in the nucleic acid synthesis pathway to the culture medium of primary cultured cells from lethal embryos (rudimentary:1-54.5), and we added different substances to the culture medium to show the degree of damage in the formation and maturation of epithelial cells. However, the metabolites in the micro-synthetic pathway are 29% at a concentration of 10^ M, 60% at <-3>a concentration of 2.5×10^ M, 100% at a concentration of 2.5×10^ M, 100% at a concentration of 2.5 × 10 <-4>^M, and <-4>100% at a concentration of 2.5 × 10 ^M<-4>. The maturation and differentiation of primary cultured epithelial cells of embryonic cells can be restored. The cells of the lethal embryo are damaged in enzymes at the early stages of the synthesis pathway, and the normal differentiation function is restored by the addition of metabolic products to the synthesis pathway.