ウシ初代培養細胞への遺伝子導入による脂肪細胞分化の誘導とその解析

原代培养牛细胞基因导入诱导脂肪细胞分化及其分析

• 批准号: 13760199
• 负责人: 谷口 幸雄
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760199/
• 关键词: ウシ; 脂肪細胞分化; 転写制御因子; 遺伝子導入; C; EBPα; EBPβ; EBPδ; PPARγ

脂肪細胞分化の制御に関わる転写因子C/EBPファミリーおよびPPARγを使い、黒毛和種牛の筋肉および脂肪組織由来の初代培養細胞に対して遺伝子導入を行うことで脂肪細胞分化の誘導を試み、これによりウシC/EBPファミリーおよびPPARγの脂肪細胞分化のおける機能を検討するとともに、筋肉組織内で起こる脂肪細胞分化の制御機構を明らかにすることを目的とした。今年度は、昨年度作製したウシC/EBPα・β・δおよびPPARγ発現ベクターのうち、C/EBPβ発現ベクターをウシ筋肉組織由来の初代培養細胞に導入し、ウシC/EBPβを恒常的に発現する細胞の樹立を試みた。C/EBPβ発現ベクターをリポソーム法によりウシ初代培養細胞に導入し、抗生物質G418により導入遺伝子がゲノムに組み込まれた細胞を選択し、ウシC/EBPβを恒常的に発現する細胞を樹立した。ウエスタンブロット解析では、樹立した細胞がC/EBPβを発現していることが確認された。この細胞に対し脂肪細胞への分化誘導を行い、Oil-Red Oによる脂肪染色および脂肪細胞のマーカーであるGPDH活性の測定を行ったが、形態的にも生化学的にも脂肪細胞への分化を観察することはできなかった。C/EBPβはマウス胚由来の脂肪前駆細胞株や線維芽細胞株に対して脂肪細胞分化を誘導することが報告されており、今回の結果はこれらと異なる結果となった。

Adipocyte differentiation の suppression に masato わ る planning write factor C/EBP フ ァ ミ リ ー お よ び PPAR gamma を い, black hair and cow の brawn お よ び adipose tissue origin の original culture cell に し seaborne て posthumous son 伝 import line を う こ と で adipocyte differentiation induced を の み, こ れ に よ り ウ シ C/EBP フ ァ ミ リ ー お よ び PPAR gamma の fat thin Function of cell differentiation の お け る を beg す 検 る と と も に, brawn tissues で up こ る adipocyte differentiation の system of the royal institution を Ming ら か に す る こ と を purpose と し た. Our は, yesterday the annual cropping し た ウ シ C/EBP alpha, beta, and delta お よ び PPAR gamma 発 now ベ ク タ ー の う ち, C/EBP beta 発 now ベ ク タ ー を ウ シ brawn tissue origin の original culture cell に import し, ウ シ C/EBP beta を constant に 発 now す る cells の set を try み た. C/EBP beta 発 now ベ ク タ ー を リ ポ ソ ー ム method に よ り ウ シ original culture cell に import し, antibiotic G418 に よ り import legacy 伝 son が ゲ ノ ム に group み 込 ま れ た cells を sentaku し, ウ シ C/EBP beta を constant に 発 now す る cells を set し た. ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト parsing で は, sets up the し た が C/EBP beta cells を 発 now し て い る こ と が confirm さ れ た. こ の cells に し seaborne fat cells へ の induction line を い, Oil Red O に よ る fat dyeing お よ び fat cells の マ ー カ ー で あ る GPDH activity determination of の を line っ た が, shape of に も biochemical に も fat cells へ の differentiation を 観 examine す る こ と は で き な か っ た. C/EBP beta は マ ウ ス embryonic origin の 駆 before fat cell lines や line d bud cell lines に し seaborne て adipocyte differentiation induced す を る こ と が report さ れ て お り, today back to の results は こ れ ら と different な る results と な っ た.