ウシ初代培養細胞への遺伝子導入による脂肪細胞分化の誘導とその解析

原代培养牛细胞基因导入诱导脂肪细胞分化及其分析

• 批准号: 13760199
• 负责人: 谷口 幸雄
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760199/
• 关键词: ウシ; 脂肪細胞分化; 転写制御因子; 遺伝子導入; C; EBPα; EBPβ; EBPδ; PPARγ

脂肪細胞分化の制御に関わる転写因子C/EBPファミリーおよびPPARγを使い、黒毛和種牛の筋肉および脂肪組織由来の初代培養細胞に対して遺伝子導入を行うことで脂肪細胞分化の誘導を試み、これによりウシC/EBPファミリーおよびPPARγの脂肪細胞分化のおける機能を検討するとともに、筋肉組織内で起こる脂肪細胞分化の制御機構を明らかにすることを目的とした。今年度は、昨年度作製したウシC/EBPα・β・δおよびPPARγ発現ベクターのうち、C/EBPβ発現ベクターをウシ筋肉組織由来の初代培養細胞に導入し、ウシC/EBPβを恒常的に発現する細胞の樹立を試みた。C/EBPβ発現ベクターをリポソーム法によりウシ初代培養細胞に導入し、抗生物質G418により導入遺伝子がゲノムに組み込まれた細胞を選択し、ウシC/EBPβを恒常的に発現する細胞を樹立した。ウエスタンブロット解析では、樹立した細胞がC/EBPβを発現していることが確認された。この細胞に対し脂肪細胞への分化誘導を行い、Oil-Red Oによる脂肪染色および脂肪細胞のマーカーであるGPDH活性の測定を行ったが、形態的にも生化学的にも脂肪細胞への分化を観察することはできなかった。C/EBPβはマウス胚由来の脂肪前駆細胞株や線維芽細胞株に対して脂肪細胞分化を誘導することが報告されており、今回の結果はこれらと異なる結果となった。

目的是使用C/EBP家族和参与调节脂肪细胞分化的调节的PPARγ转录因子来诱导源自日本黑牛的肌肉和脂肪细胞组织的原代细胞来诱导脂肪细胞分化。目的是研究牛C/EBP家族和PPARγ在脂肪细胞分化中的功能，并阐明控制肌肉组织内发生的脂肪细胞分化的机制。今年，我们引入了牛C/EBPα，EBPα，β，δ和PPARγ表达向量去年产生的C/EBPα，β，δ和PPARγ表达载体，该向量于去年产生的源自牛肌肉组织的原代培养细胞，并试图建立组成性表达牛C/EBPβ的细胞。通过脂质体方法将C/EBPβ表达载体引入原代牛培养的细胞中，并使用抗生素G418选择了将转基因整合到基因组中的细胞，并建立了组成型表达牛C/EBPβ的细胞。 Western印迹分析证实，已建立的细胞表达C/EBPβ。将细胞分化为脂肪细胞，并使用油红色O进行脂肪细胞染色，并测量GPDH活性，GPDH活性是脂肪细胞的标志物，但既无法观察到形态学或生化分化为脂肪细胞。据报道，C/EBPβ诱导脂肪细胞前体细胞系中的脂肪细胞分化和源自小鼠胚胎的成纤维细胞系，并且当前的结果与发现的结果不同。