プロテインキナ-ゼC群の分子多様性及びその構造と機能の分子生物学的解析

蛋白激酶C基团的分子多样性及其结构和功能的分子生物学分析

• 批准号: 01641543
• 负责人: 大野 茂男
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01641543/
• 关键词: プロテインキナ-ゼC; カルシウムイオン; ホルボ-ルエステル

前年度までにPKC群各分子種についてCOS細胞におけるcDNA発現系を用いて種々の生化学的性質の検討を行なってきた。その過程でnPKCεが従来のPKC(α,β,γ)とは質的に異なる新しい蛋白質である事を明らかにした。本年度はこれをさらにおし進め、キナ-ゼの基質特異性、細胞膜との相互作用、down-regulation等について各分子種の比較を行ない、明確な差のある事を見い出した。同時に各分子種のcDNAを3Y1細胞に導入する系を用いて生細胞レベルでの機能をその転写活性化能を指標として検討し、各PKC,nPKC分子種間に大きな差異のある事を見い出した。以下順を追って述べる。1.COS細施のcDNA発現系を用いて精製したPKCα,nPKCεとを用いて種々の精製蛋白質に対するリン酸化能を試験管内で検討した。その結果多くのPKC基質がnPKCεの基質にもなる事が明らかとなった。一方徴小管結合蛋白質群(MAPs)の一つtの分画に混在する蛋白(p140)がnPKCεによってのみきわめて効率よくリン酸化される事を見い出した。2.PKC,nPKCをoverexpressionさせた細胞を用いてホルボ-ルエステル処理後の各分子種の細胞内での動態を検討した結果、nPKCεについても細胞膜への移行、down-regulationという現象の起る事が明らかとなった。しかしその速度、様式は異なっていた。試験管内での細胞膜との結合実験においてPKCとnPKC間でそのco-factor依存性の明確な差のある事が確認された。3.ホルボ-ルエステル応答性遺伝子の転写活性化能をPKC,nPKCについて生細胞レベルで検討した結果、各分子種間でその遺伝子特異性に明確な差が認められた。以上を総合するとPKC,nPKCε各分子種は細胞内で異なった生理機能を担っている事が示された。

In the past year, the molecular species of PKC group have been used to investigate the biochemical properties of COS cells. PKC(α,β,γ) is a new type of protein. This year, we have made progress in the comparison of molecular species, such as matrix specificity, cell membrane interaction, down-regulation, etc. At the same time, the cDNA of each molecular species was introduced into 3Y1 cells, and the function of PKC and nPKC was studied. The following is a summary of the results. 1. COS cDNA expression system was developed by using purified PKCα,nPKCε and purified protein. Many PKC substrates are involved in the study. A subset of characteristic tubule binding proteins (MAPs) is found in protein (p140), which forms the basis for pPKC ε and pPKC ε. 2. PKC, nPKC overexpression in cells after treatment of various molecular species in the intracellular dynamics of the results, nPKCε in the middle of the cell membrane migration, down-regulation and the phenomenon of the beginning of the event. The speed and style are different. The relationship between PKC and nPKC was confirmed. 3. The activity of PKC and PKC in the gene expression system was investigated. The differences in gene specificity among different molecular species were identified. These molecular species are involved in different physiological functions within the cell.

项目成果

Yasuhiko Konno: "Enzymatic Properties of a phorbol ester receptor/protein kinase distantly related to the protein kinase C family" J.Biochem. 106. 673-678 (1989)

Yasuhiko Konno：“与蛋白激酶 C 家族密切相关的佛波酯受体/蛋白激酶的酶学特性”J.Biochem。

Yoshiko Akita: "Expression and properties of two distinct classes of the phorbel ester receptor family,four conventional protein kinase C types and a novel protein kinase C." J.Biol.Chem.265. 354-362 (1990)

Yoshiko Akita：“两种不同类型的佛贝尔酯受体家族的表达和特性，四种传统的蛋白激酶 C 类型和一种新型蛋白激酶 C。”

大野茂男: "生化学" 日本生化学会, (1989)

大野茂夫：《生物化学》日本生化学会，（1989）

Akiko Hata: "Direct evidence that the kinase activity of protein kinase C is involved in transcriptional activation through a TPA-responsive element." FEBS Lett.252. 144-146 (1989)

Akiko Hata：“直接证据表明蛋白激酶 C 的激酶活性通过 TPA 响应元件参与转录激活。”

大野茂男: "分子生物学の進歩、細胞増殖・細胞運動" 丸善, (1989)

Shigeo Ohno：“分子生物学、细胞增殖和细胞运动的进展”Maruzen，（1989）