形質膜直下アクチン構造のミリ秒変化と開口分泌

质膜下肌动蛋白结构的毫秒变化和胞吐作用

• 批准号: 01659001
• 负责人: 田代 朋子
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01659001/
• 关键词: 細胞骨格; アクチン; アクチン結合蛋白質; 熱ショック蛋白; リポコルチン; 神経終末部

形質膜直下には、アクチン繊維やスペクトリンを主体とする裏打ち構造である膜骨格が発達しており、膜の流動性、膜蛋白の局在などを調節すると考えられている。神経負末部では更に、シナプス小胞とシナプス形質膜との融合過程に重要な役割を演ずることが予想される。本研究では、神経伝達およびその制御機構における膜骨格の役割を明らかにする目的で、今年度はまづ、軸索内輸送系を利用して神経軸索および終末部で機能するアクチン調節蛋白の検索を行なった。実験系としてラット坐骨神経運動繊維を用い、細胞体の存在する脊髄前角部にLー[^<35>S]メチオニンを注入した後、遅い軸索内輸送で運ばれる標識細胞骨格蛋白を分析した結果、以下の各点が明らかになった。1.輸送される細胞骨格蛋白の速度および溶解性の分析から、軸索細胞骨格には講造維持に重要な安定重合型と重合ー脱重合平衝にあるダイナミック型という二種の重合状態が存在することが示された。遅い軸索内輸送は、安定重合型の大部分を含む成合I(1.5mm/日)と、ダイナミック型を主体とする成分II(3mm/日)の二つの速度成分から成り、実際の輸送はダイナミック型を介して起こると考えられる。アクチンは両成分にほぼ1:1の割合で分布する。2.成分IIは、アクチン、チューブリンの他に分子量68k、等電点6.0の主要構成分を含むが、これはCa^2存在下の溶解性による二種の蛋白に分離される。ペプチドマップ、抗体反応性などから、一方は、70kheat shock関連蛋白、もう一方はリポコルチン様蛋白と同定された。3.DNase I アフィニティ・クロマトにより、45k、80k、100kのGーアクチン結合蛋白が検出されたが、いづれも成分IIに局在していた。4.現在、これらアクチン調節蛋白とみられる蛋白を精製し、in vitroアクチン重合に対する作用を検討中である。

The structure of membrane structure, membrane fluidity and membrane protein distribution are regulated. The changes in the negative terminal part of the brain, the changes in the membrane, and the changes in the plasma membrane are important. The purpose of this study is to explore the role of membrane regulatory proteins in the regulation of neurotransmission and end-effector functions. The results of the analysis of cell protein in the anterior corner of the spine and in the axonal <35>transport are as follows: 1. Analysis of the velocity and solubility of cellular protein transport in axonal cells shows that there are two types of overlap states: stable overlap, overlap and offset. Most of the in-shaft transmission and stable coincidence types include the velocity components of the combination I(1.5 mm/day) and the main component II(3mm/day). 1:1 split distribution of the components in the mixture. 2. Component II contains two main components with molecular weight of 68k and isoelectric point of 6.0, and two proteins with solubility in the presence of Ca^2. The antibody is resistant to heat shock, and the protein is stable. 3. DNase I: 45k, 80k, 100k, G: 45k 4. Now, we are studying the role of these regulatory proteins in protein purification and in vitro recombination.

项目成果

田代朋子: "神経損傷後の軸索内輸送変化と細胞骨格の変化" 神経化学. 28. 296-297 (1989)

Tomoko Tashiro：“神经损伤后轴突运输的变化和细胞骨架的变化”神经化学 28. 296-297 (1989)

田代朋子: "Stable and dynamic froms of cytoskeletal proteins in slow axonal transport" Journal of Neuroscience. 9. 760-768 (1989)

Tomoko Tashiro：“缓慢轴突运输中细胞骨架蛋白的稳定和动态”《神经科学杂志》9. 760-768 (1989)。

関本澄人: "細胞骨格タンパクとともに輸送される68k軸索内タンパク" 生化学. 61. 903 (1989)

Sumitomo Sekimoto：“68k 轴突内蛋白与细胞骨架蛋白一起转运”《生物化学》61. 903 (1989)。