ガングリオシドGQ1bによる表皮細胞の分化誘導機構

神经节苷脂GQ1b诱导表皮细胞分化的机制

• 批准号: 02259206
• 负责人: 野沢 義則
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02259206/
• 关键词: ガングリオシド; GQ1b; 表皮細胞; 分化誘導

新生児マウス(Balb/C)の背部皮膚から得られたケラチノサイは、低Ca2+培養液(0.05ー0.1mM)から正常濃度(1.2mM)にまでCa2+を上昇させると分化(角化)を誘導し,cornified envelope形成やトランスグルタミナ-ゼの活性化が起こる。このCa2+シフトによる分化誘導系のシグナル伝達における生化学的変化を検討したところ、Ca2+シフト後1分間にイノシト-ル1,4,5ートリスリン酸(IP_3)の一過性の上昇が起こり,細胞内遊離[Ca2+]iの増大が生じることが示された。また各種ガングリオシドGq1b,GM1,GT1b,GD1b,Gqをケラチノサイトに添加すると、GQ1bのみに濃度依存的な[ ^3H]チミジンの取り込みの抑制が生じた。10時間後には約40%程度に減少するが、これは1α,25(OH)_2D_3の場合とほぼ同程度であった。なお,この際にトランスグルタミナ-ゼに活性上昇が開始し、時間経過とともにその活性が増大し、cornified envelope形成をきたす。初期応答としては、IP_3産生に一致した[Ca2+]i上昇が起こるが、その大部分は滑面小胞体からの動員に由来する。マウスケラチノサイトはTPAで分化誘導されることが知られており,プロテインキナ-ゼ(PKC)の関与が重要視されている。そこで,あらかじめホルボ-ル誘導体(PdBu)で長時間処理してPKCをdownーregulationさせたり、また、Hー7でPKCを阻害すると、VD_3やGQ1bによるcornified envelopeの形成およびトランスグルタミナ-ゼの活性化は共に抑制されたことから,細胞膜受容体を介するGQ1b刺激の際にPKC活性化が必要であることが明らかにされた。ケラチノサイトのPKCの同定を各種アイソザイム(α,β,γ)の特異抗体を用いてWestern blotを行ったところ,α型が主成分であることを明らかにしたが、最近nPKCがケラチノサイトに特異的に多く発現していることが示され、このタイプの分化における意義が注目される。

New where マ ウ ス (Balb/C) の back skin か ら must ら れ た ケ ラ チ ノ サ イ は, low Ca2 + culture (0.1 mM) 0.05 ー か ら normal concentration (1.2 mM) に ま で Ca2 + を rise さ せ る と differentiation (Angle) を induced し, cornified The envelope forms やトラ, スグ, スグ, タ, タ, ナ-ゼ, <s:1> to activate が and が る. こ の Ca2 + シ フ ト に よ る induction is の シ グ ナ ル 伝 da に お け る variations of biochemistry を beg し 検 た と こ ろ, Ca2 + シ フ ト after 1 minute between に イ ノ シ ト - ル 1, four, five ー ト リ ス リ ン acid (IP_3) の transient の rise since が こ り, intracellular free [Ca2 +] I born の raised large が じ る こ と が shown さ れ た. ま た various ガ ン グ リ オ シ ド Gq1b, this, GT1b, GD1b, Gq を ケ ラ チ ノ サ イ ト に add す る と, Gq1b の み に concentration dependent な [^ 3 h] チ ミ ジ ン の take り 込 み の inhibit が raw じ た. After 10 time に は に reduce about 40% degree す る が, こ れ は 1 alpha, 25 (OH) _2D_3 の occasions と ほ ぼ with degree で あ っ た. な お, こ の interstate に ト ラ ン ス グ ル タ ミ ナ - ゼ に active rise が start し, time 経 と と も に そ の active が raised large し, cornified envelope forming を き た す. Early 応 answer と し て は, uniform に IP_3 produced し た [Ca2 +] I rose が up こ る が, そ の most は sliding surface small cell body か ら の mobilization に origin す る. マ ウ ス ケ ラ チ ノ サ イ ト は TPA で induction さ れ る こ と が know ら れ て お り, プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ (PKC) の masato and important visual さ が れ て い る. そ こ で, あ ら か じ め ホ ル ボ - ル inductor (PdBu) で long 処 Richard し て PKC を down ー regulation さ せ た り, ま た, H ー 7 で PKC を resistance against す る と, VD_3 や GQ1b に よ る cornified Envelope の form お よ び ト ラ ン ス グ ル タ ミ ナ - ゼ の activeness は に rejection さ れ た こ と か ら, cell membrane by let body を interface す る GQ1b stimulus の interstate に PKC activation が necessary で あ る こ と が Ming ら か に さ れ た. Youdaoplaceholder0 ケラチノサ ト <e:1> <s:1> PKC <e:1> is used to determine を various ア ソザ ソザ ム ム(α,β,γ) <s:1> specific antibodies を with ト てWestern Line blot を っ た と こ ろ, alpha type が principal component で あ る こ と を Ming ら か に し た が, recently nPKC が ケ ラ チ ノ サ イ ト に more specific に く 発 now し て い る こ と が shown さ れ, こ の タ イ プ の differentiation に お け significance る が さ れ る.

项目成果

Kanoh,H.: "Partial purification and characterization of phosphatidylinositol kinases from human platelets" Biochim.Biophys.Acta. 1046. 120-126 (1990)

Kanoh,H.：“人血小板中磷脂酰肌醇激酶的部分纯化和表征”Biochim.Biophys.Acta。

Nagata,K.: "The ram:a novel low molecular weight GTPーbinding protein cDNA from a rat megakaryocyte library" FEBS Lett.275. 29-32 (1990)

Nagata, K.：“公羊：来自大鼠巨核细胞文库的新型低分子量 GTP 结合蛋白 cDNA”FEBS Lett.29-32 (1990)。

Fu,T.: "Receptorーlinked early events induced by vasoactive intestinal conttactor(VIC)on neurolastoma and vascular smoothーmuscle cells" Biochem.J.272. 71-72 (1990)

Fu, T.：“神经母细胞瘤和血管平滑肌细胞上血管活性肠道接触器 (VIC) 诱导的受体相关早期事件”Biochem.J.272 (1990)。

Okano,Y.: "Advances in Second Messenger and Phosphoprotein Research" Raven Press,New York, 6 (1990)

Okano,Y.：“第二信使和磷蛋白研究的进展”Raven Press，纽约，6 (1990)

Yada,Y.: "Purification and characterization of cytosolic diacylglycerol kinases of human platelet" J.Biol.Chem.265. 19237-19243 (1990)

Yada，Y.：“人血小板胞质二酰甘油激酶的纯化和表征”J.Biol.Chem.265。