免疫系担当細胞の発生・分化に関与するリンホカイン及びその受容体の解析

参与免疫系统细胞发育和分化的淋巴因子及其受体的分析

• 批准号: 02262230
• 负责人: 高津 聖志
• 金额: $ 7.68万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02262230/
• 关键词: ILー5; ILー5受容体; 長期骨髄細胞培養法; B前駆細胞; ILー5受容体cDNA

本研究の目的は,免疫系担当細胞の発生・分化におけるILー5の役割を見きわめ,ILー5受容体遺伝子を単離することによりILー5受容体の構成を明らかとし,ILー5受容体の種々の細胞における発現を検索することにある。1.まず長期骨髄細胞培養法を用いてILー5は好酸球の増殖とCD5(Ly1)陽性B前駆細胞の維持に有効であることを見い出した。また同時にこの培養によりT88ーMとY16という2つのILー5反応性の細胞株を樹立した。共に約10,000個の低親和性受容体(解離定数:K_D約5nM)と約1,000個の高親和性受容体(K_D約20pM)を有していた。2. ^<35>S標識ILー5を用いた化学架橋実験より,低親和性受容体は分子量約60,000の分子より,高親和性受容体はさらに分子量130,000の分子が結合してヘテロダイマ-を形成することにより構築されていると予想されている。(1)本実験ではこの分子量約60,000の分子を免疫沈降させる2つの抗体H7とT21と発現ベクタ-CDM8を用いてこの分子をコ-ドするCDNA,pILー5R.8を単離した。このcDNAをCOS7細胞で発現させることにより,この遺伝子が分子量約60,000の低親和性ILー5受容体をコ-ドしていることが示された。またこの遺伝子は親株以外にCD5^+の慢性B白血病細胞株BCL_1,またIgM産生ミエロ-マMOPC104Eで発現が認められ,mRNAのサイズは5.8kbおよび5.0kbの2種類であった。(2)また我々はT88ーM細胞3×10^<11>個よりH7結合ゲルを用いて分子量約60,000の分子を精製しそのN端17個のアミノ酸配列を決定した。その配列はcDNAから予想される18番目のアミノ酸残基から17個目までのアミノ酸残基に相当しており,cDNAはH7抗体の認識する分子をコ-ドすることが確認された。3.正常マウスの腹腔B細胞のほとんどがH7抗原を持っており,その70%以上がCD5陽性であった。この他骨髄および脾臓の一部の細胞にH7抗原の発現が認められる。今後造血分化におけるILー5受容体の発現調節を検討する予定である。

Bear は の purpose, this study of immune system cells の 発 raw, differentiation に お け る IL ー 5 の "を cutting saw き わ め, IL ー 5 by let body heritage 伝 son を 単 from す る こ と に よ り IL ー 5 by let body の constitute を Ming ら か と し, IL ー 5 by let body の 々 の cells に お け る 発 now を 検 cable す る こ と に あ る. 1. ま ず long bone marrow cell culture method を with い て IL ー 5 は の raised acid good colonization と CD5 (Ly1) positive B before 駆 cells の maintain に unseen で あ る こ と を see い out し た. ま た simultaneously に こ の cultivate に よ り T88 ー M と Y16 と い う 2 つ の IL ー 5 against 応 sex の cell lines を set し た. There are approximately に 10,000 <s:1> low-affinity acceptors (dissociation number :K_D about 5nM)と about 1,000 <s:1> high-affinity acceptors (K_D about 20pM)を and て て た た. 2. ^ < > 35 S identity IL ー 5 を with い た chemical bridging be 験 よ り, low affinity by let body は molecular weight about 60000 の molecular よ り, high affinity by let body は さ ら に molecular weight 130000 の molecular が combining し て ヘ テ ロ ダ イ マ を formed す る こ と に よ り build さ れ て い る と to think さ れ て い る. (1) this be 験 で は こ の molecular weight about 60000 の molecules を sink さ せ る 2 つ の antibody H7 と T21 と 発 now ベ ク タ - CDM8 を with い て こ の molecular を コ - ド す る CDNA, pIL ー 5 r. 8 を 単 from し た. こ の cDNA を COS7 cell で 発 now さ せ る こ と に よ り, こ の posthumous son 伝 が low molecular weight about 60000 の affinity IL ー 5 by let body を コ - ド し て い る こ と が shown さ れ た. ま た こ の posthumous son 伝 は parent strain outside に CD5 ^ + の chronic leukemia cell lines BCL_1 B, ま た IgM produce ミ エ ロ - マ MOPC104E で 発 が now recognize め ら れ, mRNA の サ イ ズ は 5.8 KB お よ び 5.0 KB の 2 kinds で あ っ た. (2) ま た I 々 は T88 ー M cells 3 x 10 ^ < 11 > a よ り H7 combining ゲ ル を with い て molecular weight about 60000 の molecular を refined し そ の n-terminal 17 の ア ミ ノ acid with column を decided し た. そ の match column は cDNA か ら to think さ れ る 18 times eye の ア ミ ノ acid residues か ら 17 mesh ま で の ア ミ ノ acid residues に quite し て お り, cDNA は H7 antibody の know す る molecular を コ - ド す る こ と が confirm さ れ た. 3. In normal <s:1> ウス <s:1> peritoneal B cells, <s:1> ほとん <s:1> がH7 antigen を holds ってお,そ <s:1> is more than 70% がCD5 positive であった. The にH7 antigen assay of a cell in a part of his bone marrow および, spleen および shows が recognition められる. In the future, hematopoietic differentiation におけるIL における 5 receptor <s:1> occurrence regulation を検 is determined by する である.

项目成果

Sigeki Katoh,et al.: "Conversion of normal Lyー1ーpositive Bーlineage cells into Lyー1ーpositive macrophages in longーterm bone marrow cultures." Developmental'Immunol.(1990)

Sigeki Katoh 等人：“在长期骨髓培养中将正常 Ly-1 阳性 B 系细胞转化为 Ly-1 阳性巨噬细胞”（DevelopmentalImmunol）。

Naoto Yamaguchi,et al.: "Characterization of the murine interleukin 5 receptor by using a monoclonal antibody." Int.Immunol.2. 181-187 (1990)

Naoto Yamaguchi 等人：“使用单克隆抗体表征鼠白细胞介素 5 受体。”

Yasumichi Hitoshi,et al.: "Distribution of ILー5 receptorーpositive B cells,Expression of ILー5 receptor on Lyー1(CD5)^+ B cells." J.Immunol.144. 4218-4225 (1990)

Yasumichi Hitoshi 等人：“IL-5 受体阳性 B 细胞的分布，Ly-1(CD5)^+ B 细胞上 IL-5 受体的表达。J.Immunol.144 (1990)。

Akira Tominaga,et al.: "Transgenic mice expressing a B cell growth and differentiation factor gene(Interleukin 5) develop eosinophilia and auto antibody production." J.Exp.Med.(1991)

Akira Tominaga 等人：“表达 B 细胞生长和分化因子基因（白细胞介素 5）的转基因小鼠出现嗜酸性粒细胞增多症和自身抗体产生。”

Satoshi Takaki,et al.: "Molecular cloning and expression of the murine interleukinー5 receptor." The EMBO J.9. 4367-4374 (1990)

Satoshi Takaki 等人：“小鼠白细胞介素 5 受体的分子克隆和表达。” EMBO J.9 (1990)。