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糖蛋白質極性分泌のための選別機構

糖蛋白极性分泌的分选机制

基本信息

批准号：
06248216
负责人：
佐々木隆造
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

赤血球造血因子であるエリスロポエチン(EPO)を腎尿細管由来の上皮細胞であるMDCK細胞に生産させたところ,EPOはもっぱら端頂面に分泌された。EPOに存在する3箇所のN結合型糖鎖付加部位を全て欠損させた変異EPOは,端頂面及び底側面に均等に分泌された極性分泌が完全に消失することを発見した。この事実は極性分泌に糖鎖が重要な機能を持つことを示す。そこで3箇所の糖鎖付加部位に関して全ての組合わせで(1箇所及び2箇所糖鎖付加部位に変異を持つ合計6種)変異EPOを作成し,MDCK細胞での極性分泌を調べ,極性分泌を支配する糖鎖付加部位を決定した。EPOは24,38,83番目のAsnにN-結合型糖鎖を持つが,38番目のAsnをGlnに変換しN-結合型糖鎖を欠失した変異体は端頂面及び底側面にほぼ均等に分泌され,EPOの極性分泌には38番目の糖鎖が重要であることを証明した。野性型および各種変異型EPOについて,端頂面と底側面に分泌されたEPOのin vitro活性及びSDS-電気泳動による分子サイズを比較したが,ほとんど差はなかった。野性型EPOを発現させたMDCK細胞に細胞内微小管の重合化の阻害剤であるノコダゾールを作用させた所,極性分泌に必要なタイトシャンクションは完全であるにもかかわらず,EPOの分泌は底側面に分泌されるようになった。この場合,底側面と端頂面とに分泌された総EPO量はノコダゾール非依存下の場合と変わりなかった。すなわち,糖蛋白質の極性分泌に細胞内微小管が重要な役割をはたしていることを示した。肝細胞増殖因子(HGF)は,上皮細胞の運動性を上昇させたり,MDCK細胞に管状構造を形成させる効果を持ち,これらの効果は上皮細胞の細胞骨格構造の変化に起因すると考えられている。野性型EPOを生産するMDCK細胞にHGFを与えると,極性分泌が見られなくなり更に総分泌量は2倍に増加した。

Hematopoietic factor (EPO) is produced by MDCK cells derived from renal tubules. EPO is secreted from the top of renal tubules. EPO was found to have three N-binding sites, which were completely deficient in EPO, and to be equally secreted at the top and bottom. This is a very important function of sugar lock. All combinations of 3 carbohydrate binding sites (1 site and 2 carbohydrate binding sites) are different. Different EPO is produced. The polarity secretion of MDCK cells is regulated. The carbohydrate binding sites controlled by polarity secretion are determined. EPO 24, 38, 83 Asn, N-conjugated glycogen lock, Asn, Gln, The wild type has a variety of different types of EPO, such as the top surface and the bottom surface, which are secreted by EPO in vitro activity and SDS-electrophoresis. Wild EPO is produced in MDCK cells and inhibits the recombination of intracellular microtubules. It is essential for polar secretion. EPO is secreted at the bottom of the cell. In this case, the amount of EPO secreted from the bottom surface and the top surface is not dependent on the situation. The polar secretion of glycoproteins is an important part of intracellular microtubules. Hepatocyte growth factor (HGF) increases the motility of epithelial cells, and MDCK cells maintain the effects of tubular structure formation, which causes the cellular skeletal structure transformation of epithelial cells. The amount of HGF secreted by wild EPO cells increased by 2 times.