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酸素による遺伝子発現調節機構を利用した腫瘍細胞死の誘発

利用氧诱导基因表达调控机制诱导肿瘤细胞死亡

基本信息

批准号：
10876074
负责人：
佐々木隆造
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、ガン組織が常に低酸素状態にあることを利用して、低酸素エンハンサーを用いて特異的に腫瘍細胞にのみ細胞死を誘発する方法論を開発することを目的とした。プロモーターには、全ての細胞で低酸素エンハンサーと相互作用しうる乳酸脱水素酵素(LDH)のプロモーターを使用し、アンチセンスRNAを発現させる因子は、解糖系の律速酵素であるLDHおよび多薬耐性の原因遺伝子の1つであるMDRを対象とした。これらをHep3B細胞に遺伝子導入し、アンチセンスRNAを発現した細胞を各々50株取得した。これらの細胞株の増殖を、in vitroにおいて目的とする性質(低酸素或いは薬剤投与による死滅)が獲得されているかについて検証した。LDHのアンチセンスRNAを発現した細胞と親株を低酸素分圧に導入し、細胞増殖活性を測定した。しかし親株に比べて有為に増殖活性の低下したクローンはなかった。LDHプロモーターの活性は十分強いが、LDH遺伝子の発現も多いために発現したアンチセンスRNAではLDH mRNAを十分には阻害できなかったと考えられた。一方MDRのアンチセンスRNAを発現する細胞株については低酸素にした後、抗ガン剤を投与した。その結果、薬剤に対する抵抗性がある程度低下した。しかし今回導入したHep3B細胞には抗ガン活性を持つ因子としてMDR以外にMRPも発現しているらしく期待したほどの効果は得られなかった。以上低酸素に応答するアンチセンスRNA発現系はガン細胞の増殖を抑制する系として有効であるが、今後より有効性を確認するためには発現させるアンチセンスRNAの種類を検討する必要があると考えられた。

The aim of this study is to develop a methodology for the induction of cell death in tissue by using low-and medium-level enzymes. The use of lactate dehydratase (LDH) and its interaction with the whole cell are factors that cause the development of LDH and MDR resistance. 50 strains of Hep3B cells were obtained from each cell line. These cell lines grow in vitro, and their properties (low acidity or medium toxicity) are examined. LDH gene expression was measured in cells and parental plants. There is a lack of reproductive activity in the plant. The activity of LDH is very strong, and the expression of LDH mRNA is very strong. A cell line that produces MDR RNA has a low level of DNA and a high level of DNA resistance. As a result, the resistance of the drug is low. In addition to MDR, Hep3B cells are expected to produce anti-tumor activity. The gene expression system of the above-mentioned low acid protein is to inhibit the proliferation of the cell, and to confirm the gene expression system of the future low acid protein.