神経伝達物質遊離に関わるフクティブゾーン複合体の生理機能

参与神经递质释放的功能区复合体的生理功能

• 批准号: 06253217
• 负责人: 吉田 明
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06253217/
• 关键词: PC12細胞; シナプトタグミン; 神経伝達物質放出; シナプトブレビン; シンタキシン; タンパク質リン酸化

神経伝達物質遊離に関わるアクティブゾーン複合体の生理機能を明らかにするため、まず、シンタキシン、VAMP、SNAP-25などと共にアクティブゾーン複合体を形成するシナプトタグミン(SYT)を欠失したPC12細胞を用い分泌能の検討を行った。刺激は神経伝達物質の異常分泌を引き起こすαラトロトキシン(αLTX)を用い予め細胞に取り込ませた[^3H]ノルエピネフリンの遊離を測定した。外液にCaが存在する条件でαLTXを作用させると、欠損株も正常株と同様の神経伝達物質の遊離を示した。一方、細胞外にCaが存在しない条件では、正常PC12細胞で見られる神経伝達物質の遊離が欠損株ではほとんど観察されなかった。この欠損株にラットのSYT1遺伝子を導入し、SYTの発現レベルが異なる細胞株を4クローン作成した。このSYT発現回復株では、Ca非依存的なαLTX誘発性伝達物質遊離能の回復が見られた。以上の結果からSYT1がαLTXにより引き起こされる神経伝達物質遊離に関わることが明らかとなった。次に、SYT1のCa/CaM kinase IIによるリン酸化部位の検討を行った。精製したSYTをCa/CaM kinase IIによりリン酸化した後、2Dペプチドマッピングを行ったところ、主にリン酸化されているペプチドは一断片のみであった。大腸菌で発現させたSYT1のC末端領域(αLTX受容体との結合部位)融合蛋白質は、Ca/CaM kinase IIによりリン酸化された。以上の結果からSYTはニューレキシンとの相互作用に関わるC末端領域がCa/CaM kinase IIによりリン酸化されることが示唆された。本研究によりアクティブゾーン複合体を形成しているタンパク質の分泌への関与が明らかとなり、また、その結合がタンパク質リン酸化酵素により調節される可能性が示唆された。

The physiological mechanism of the complex is able to understand the effect of the complex on the formation of the complex (SYT). The PC12 cell uses the secretory energy to detect the growth of the complex. The physiological mechanism of the complex is known to be sensitive, sensitive and sensitive. To stimulate the secretion of alpha-phenylephrine (α-LTX) to induce the determination of alpha-phenylephrine (alpha-alpha) by using the alpha-alpha (alpha-alpha) to the cell (alpha). There are several conditions in the external liquid "Ca", such as the action of α-LTX, the absence of "normal plants" and the presence of phenotypic substances. On the one hand, there are some conditions in the extracellular Ca, and the normal PC12 cells do not need to be detected. The whole cell line was made from the SYT1 cell line in the first place and the cell line in the cell line in the first half of the year, and the cell line was formed in the first half of the year. The whole cell line was made from the cell line, which was detected by the SYT virus. Now that SYT is isolated, Ca-independent α-LTX sexual substances can be returned to normal. As a result of the above results, SYT1