トポイソメラーゼ阻害剤による白血病細胞のアポトーシス誘発機構の解明

阐明拓扑异构酶抑制剂诱导白血病细胞凋亡的机制

• 批准号: 06770844
• 负责人: 吉田 明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770844/
• 关键词: アポトーシス; 白血病細胞; トポイソメラーゼ阻害剤

抗腫瘍剤による白血病細胞のapoptosis誘発機構に関して、特にapoptosisに密接に関与すると考えられるendonucleaseを分離・同定することを目的として、検討を実施し、以下の結果が得られた。【結果】1)抗腫瘍剤VP-16処理による細胞質内Mg^<2+>依存性endonucleaseの活性化:HL-60細胞を20uM VP-16と共に3時間培養するとladder DNA fragmentationが認められた.この時点における細胞質分画に存在するMg^<2+>依存性endonuclase活性を^3H-E.Coli DNAを基質として測定したところ,無処理のcontrol細胞と比して6倍の上昇が認められた.またVP-16と共に培養した細胞から分離した細胞質分画を未処理HL-60分離核に加えるとMg^<2+>依存性の条件下で著名なladder DNA fragmentationを誘導した.一方,未処理のcontrol細胞において,このような活性は認められなかった.2)蛋白分解酵素阻害剤およびカルシウム・キレーターによるDNA fragmentation阻害効果:VP-16によるnucleosomal ladderはEGTAでは抑制されなかったが,細胞内Ca^<2+>キレーターであるBAPTA-AMで強く抑制された.また蛋白分解酵素阻害剤であるTPCKも著明にVP-16によるnucleosomal ladderを抑制した.TPCKまたはBAPTA-AMによりDNA fragmentationが阻害された状態にある細胞より分離した細胞質分画のendonuclease活性は,未処理control細胞と比して有意差を認めなかった.【結論】抗腫瘍剤etoposideを作用させた白血病細胞においてはMg^<2+>依存性のendonucleaseが活性化されapoptosisが誘導されることが示唆される.また,このendonucleaseの活性化過程においては,蛋白分解酵素および内因性Ca^<2+>が重要な役割を果たしていると考えられる.

Anti-tumor agent for leukemia cell apoptosis induction mechanism related to the study of endonuclease isolation, synchronization, the following results were obtained [Results] 1) Activation of Mg^<2+>-dependent endonucleases in HL-60 cells treated with VP-16:20uM VP-16 for 3 days. The presence of Mg^2+>-dependent endonuclease activity in the cytoplasm of the untreated cells increased by 6-fold compared with the untreated cells. VP-16 cells were isolated from the cytoplasm by co-culture. HL-60 cells were isolated from the nucleus and Mg^<2+>-dependent cells. 2) Proteolytic enzyme inhibitor:VP-16, nucleosomal ladder, EGTA, intracellular Ca^<2+>, BAPTA-AM, strong inhibition. Proteolytic enzyme inhibition was detected by TPCK and VP-16. DNA fragmentation was inhibited by BAPTA-AM. Cytoplasmic endonuclease activity was inhibited by TPCK and untreated control cells. [Conclusion] Antitumor agent etoposide can induce apoptosis by activating Mg^<2+>-dependent endonuclease in leukemia cells. In the process of activation of this endonuclease, proteolytic enzymes and endogenous Ca^<2+> are important for the production of enzymes.

项目成果

吉田 明: "白血病細胞のアポトーシス誘導因子" 医学のあゆみ. 173(発表予定). (1995)

Akira Yoshida：“白血病细胞的凋亡诱导因子”，《医学史》173（待出版）。