神経伝達物質放出の分泌装置複合体を形成するシンタキシン/VAMPの役割

Syntaxin/VAMP 在形成神经递质释放的分泌装置复合体中的作用

• 批准号: 06680771
• 负责人: 吉田 明
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680771/
• 关键词: 神経伝達物質放出; シンタキシン; シナプトブレビン; シナプトタグミン; PC12細胞; タンパク質リン酸化

神経伝達物質放出に関わる分泌装置複合体の生理機能を明らかにするため、まず、シンタキシン、VAMP、SNAP-25などと共に分泌装置複合体を形成するシナプトタグミン(SYT)を欠失したPC12細胞を用い分泌能の検討を行った。刺激は神経伝達物質の異常分泌を引き起こすαラトロトキシン(αLTX)を用い予め細胞に取り込ませた[^3H]ノルエピネフリンの放出を測定した。外液にCaが存在する条件下でαLTXを作用させると、欠損株も正常株と同様の神経伝達物質の放出を示した。一方、細胞外にCaが存在しない条件では、正常PC12細胞で見られる神経伝達物質の放出が欠損株ではほとんど観察されなかった。この欠損株にラットのSYT1遺伝子を導入し、SYTの発現レベルが異なる細胞株を4クローン作成した。このSYT発現回復株では、Ca非依存的なαLTX誘発性伝達物質放出能の回復が見られた。以上の結果からSYT1がαLTXにより引き起こされる神経伝達物質放出に関わることが明らかとなった。次に、SYT1のCa/CaM kinaseIIによるリン酸化部位の検討を行った。精製したSYTをCa/CaMkinase IIによりリン酸化した後、2Dペプチドマッピングを行ったところ、主にリン酸化されているペプチドは一断片のみであった。大腸菌で発現させたSYT1のC末端領域(αLTX受容体との結合部位)融合蛋白質は、Ca/CaM kinase IIによりリン酸化された。以上の結果からSYTはニューレキシンとの相互作用に関わるC末端領域がCa/CaM kinase IIによりリン酸化されることが示唆された。本研究により分泌装置複合体を形成しているタンパク質の分泌へに関与が明らかとなり、また、その結合がタンパク質リン酸化酵素により調節される可能性が示唆された。

The physiological function of secretion apparatus complex related to the release of neurotransmitter substance is clearly described. The secretion apparatus complex is formed by VAMP, SNAP-25 and the secretion apparatus complex is missing. The secretion function of PC12 cells is discussed. Stimulation of abnormal secretion of neurotransmitter substances induced by α-LTX was used to determine the release of neurotransmitter substances from cells In the presence of Ca, α-LTX acts as a catalyst for the release of the same substance from the damaged plant. In one case, extracellular Ca is present in normal PC12 cells, but the release of substances from the cells is not detected. The SYT1 gene of the defective strain was introduced, and the SYT gene was developed. SYT recovery plant, Ca independent αLTX induction material release energy recovery The above results show that SYT1 α LTX αLTX α L α LTX α LTX Ca/CaM kinase II in SYT1 and SYT2 was detected by PCR. Fine preparation of SYT Ca/CaMkinase II, 2D selection, acid selection, etc. E. coli development of SYT1 C-terminal domain (αLTX receptor and binding site) fusion protein, Ca/CaM kinase II protein The above results show that the interaction between Ca/CaM kinase II and SYT is related to the C-terminal domain. This study demonstrates the possibility of the formation of secretory apparatus complexes and the regulation of the secretion of proteins by binding enzymes.

项目成果

Yoko Shoji-Kasai: "Synaptotagmin I is essential for Ca^<2+>-independent release of neurotransmitter induced by α-1atrotoxin" FEBS Letters. 353. 315-318 (1994)

Yoko Shoji-Kasai：“突触结合蛋白 I 对于 α-1atrotoxin 诱导的 Ca^2+ 神经递质独立释放至关重要”，FEBS Letters 353. 315-318 (1994)。