シナプス機能におけるグリア由来AMPA受容体の役割についての発生工学的解析
胶质细胞AMPA受体在突触功能中的作用的发育工程分析
基本信息
- 批准号:06253222
- 负责人:
- 金额:$ 1.54万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:1994
- 资助国家:日本
- 起止时间:1994 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1 グルタミン酸受容体GluR3サブユニット変異体であるsGluR3はAMPA受容体特異的にdominant-negative作用をもつことをアフリカツメガエル卵を用いた遺伝子発現実験により確認した。このことはsGluR3がAMPA受容体機能をin vivoで修飾する発生工学的ツールになりうる可能性を示している。この可能性を検討し、さらにAMPA受容体機能の生体における役割を解明するため、sGluR3を過剰発現するトランスジェニックマウスの作成を試みた。sGluR3cDNAをβactin promoter並びにglial fibrillary acidic protein(GFAP)promoterの下流にサブクローニングし各々のトランスジーンをマウス受精卵前核に注入しトランスジェニックマウスの作成を行った。約500個の処置卵からβactin promoterについては5匹の、GFAPpromoterについては3匹の生存トランスジェニックマウスを得た。各トランスジェニックマウスの系統化を試みβactin promoterについては3系統、GFAPpromoterについては2系統を確立した。各系統につき脳内でのsGluR3mRNAの発現をRT-PCR法で解析したところβactin promoterを使用した1系統が陽性であった。当該系統におけるsGluR3蛋白の発現の有無をWestern blot法により解析したが脳内での発現を確認できなかった。今後は繁殖が遅れておりまだ未検査であるGFAP promoter使用の1系統の解析を進めるとともに、sGluR3のconditional expression法を検討する予定である。2 sGluR3は正常GluR3と違いputative transmembrane domain3と4の間で33個のアミノ酸が欠失している。この33個のアミノ酸のうちsGluR3のdomainant-negative作用にも最も関与するアミノ酸残基を見いだすため、まず前から順に9個、8個、8個、8個のアミノ酸を欠失した新しい変異体(S1〜S4)を作成しそのdominant-negative作用の有無をアフリカツメガエル卵遺伝子発現系で検討した。その結果、S1およびS4が元のsGluR3に匹敵する作用をもつことが判明した。今後さらにS1およびS4で欠失した部分の解析を進める予定である。
1. GluR3 is an AMPA receptor-specific dominant-negative action. This shows the possibility that GluR3 can function as an AMPA receptor in vivo and be modified by bioengineering. This possibility is discussed in detail below. The biological function of AMPA receptor is explained in detail below. The function of sGluR3 is discussed in detail below. sGluR3 cDNA is a βactin promoter and glial fibrillary acidic protein(GFAP)promoter. About 500 eggs were obtained from βactin promoter and GFAPpromoter. The systematization of each type of promoter is tried. The βactin promoter is established in 3 systems and GFAP promoter is established in 2 systems. The expression of sGluR3 mRNA in each system was analyzed by RT-PCR and the βactin promoter was used. Western blot analysis was performed to confirm the presence of sGluR3 protein in the system. In the future, the GFAP promoter will be used for the analysis of the system. 2 GluR 3 is normal GluR3 is abnormal in putative transmembrane domain3 and 4, and 33 are abnormal in putative transmembrane domain 4. Among the 33 amino acid residues, 9, 8, 8, and 8 were found to have domainant-negative effects on the dominant-negative effects of GluR3, and the presence or absence of domainant-negative effects on the dominant-negative effects of GluR3 was investigated. The results of S1 and S4 are as follows: In the future, the analysis of the missing parts of S1 and S4 will be further determined.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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