神経細胞・神経軸索機能維持因子の同定と機能解析

维持神经细胞和轴突功能的因素的鉴定和功能分析

• 批准号: 08256245
• 负责人: 和田 圭司
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: National Center of Neurology and Psychiatry
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08256245/
• 关键词: 疾患モデルマウス; 連鎖解析; ポジショナルクローニング; 分子遺伝学; 軸索変性; グルタミン酸; トランスポーター; 相同組み換え体

1)神経細胞死モデル動物の開発グルタミン酸トランスポーターはグルタミン酸の取り込み分子であり、神経系においては細胞外グルタミン酸濃度を低く保つことで適正なグルタミン酸伝達を支える。グリア型とニューロン型に分類されるが今回グリア型の一つであるGLT1の生理的・病態生理的役割を解明する目的でGLT1を欠損したマウスの作製を行なった。G418とGANCを用いたpositive-negative selectionでエクソン4について相同組み換えを起こしたE14ES細胞を選別し、常法に従いC57BL/6Jマウスとの交配で遺伝子欠損マウスを作製した。GLT1欠損マウスはメンデルの法則に則って出生した。生直後は特に異常を認めなかったが、成長に連れ低体重が顕著となり半数が生後6週までに死亡した。神経学的にはけいれんを認め、病理学的には海馬CA1領域の神経細胞死を多くの例で認めた。2)軸索変性モデル動物の解析遺伝的に早期から神経軸索が逆行性の変性に陥るgracile axonal dystrophy(gad) mouseを使用して神経軸索の機能維持、神経回路保持に不可欠な因子を同定する目的で研究を進めた。昨年度までに遺伝子連鎖解析からgad遺伝子がマウス第5番染色体上D5Mit197とD5Mit151の2つのマイクロサテライトマーカーに挟まれた約0.8cMの領域に存在する可能性の高いことを見出したので、今年度はD5Mit197とD5Mit151を用いて酵母人工染色体(YAC)ならびに大腸菌人工染色体(BAC)ライブラリーのスクリーニング、得られたクローンからのwalkingを引き続き行ない当該領域のうち約900kbをカバーするcontingを作成した。また作成されたcontingの中からエクソントラップ法によりmRNAに転写されるシークエンスを複数見い出した。

1)In the development of neurocytic animals, the concentration of extracellular acid in the brain is kept low, and the concentration of extracellular acid in the brain is maintained at a low level. The physiological and pathological characteristics of GLT1 are analyzed and analyzed according to the classification of GLT1. G418 and GANC use positive-negative selection to select and control C57BL/6J cells from the same group. GLT1 is not a good idea. After birth, they are abnormal, grow up, and lose weight. Half of them die at 6 weeks after birth. Neurological and pathological aspects of neuronal death in hippocampus CA1 2)The early development of axonal analysis in animals with axonal variability, the use of a gracile axonal dystrophy(gad) mouse, the maintenance of axonal function, and the maintenance of essential factors in the maintenance of the nervous circuit are the objectives of this study. The genetic linkage between the two genes was found at D5Mit197 and D5 Mit151 on chromosome 5 last year, and the possibility of existence in a domain of about 0.8 cM was high this year. The yeast artificial chromosome (YAC) was found at D5Mit197 and D5Mit151 this year, and the Escherichia coli artificial chromosome (BAC) was found at D5 Mit197 and D5Mit151 this year. When the domain is about 900kb, the following steps are taken: In addition, it is necessary to establish a method for determining the mRNA content of the protein.

项目成果

Yamada,K.et al.: "Changes in expression and distribution of the glutamate transporter EAAT4--" Neurosci.Res.(印刷中).

Yamada, K. 等人：“谷氨酸转运蛋白 EAAT4 的表达和分布的变化——”Neurosci.Res（出版中）。

Shibata T.et al.: "Dynamic changes in expression of glutamate transporter mRNAs in developing--" Neuroreport. 7・3. 705-709 (1996)

Shibata T. 等人：“发育过程中谷氨酸转运蛋白 mRNA 表达的动态变化——”Neuroreport 7·3 (1996)。

Watase,K.et al.: "Dominant negative mutant of ionotropic glutamate receptor subunit GluR3--" Biochem.J.(印刷中).

Watase, K. 等人：“离子型谷氨酸受体亚基 GluR3 的显性负突变体——”Biochem.J。

Suh,J.G.et al.: "An in-frame deletion in peripheral myelin protein-22 gene causes hypomyelination--" Neuroscience. (印刷中).

Suh，J.G. 等人：“外周髓磷脂蛋白 22 基因的框内缺失导致髓鞘形成不足——”《神经科学》（出版中）。

Hagiwara,T.et al: "Genomic organization,promoter analysis and chromosomal localization of---" Genomics. 33・2. 508-515 (1996)

Hagiwara, T. 等人：“基因组组织、启动子分析和染色体定位——”基因组学 33・2（1996）。