ショウジョウバエ中枢神経系培養細胞株を用いた細胞増殖阻害因子の研究

利用培养果蝇中枢神经系统细胞系研究细胞生长抑制因子

• 批准号: 06256217
• 负责人: 程 久美子
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06256217/
• 关键词: Drosophila; 中枢神経系; 培養細胞株; Apoptosis; DNA fragmentation; Ca^<2+>; 細胞内情報伝達系; 細胞生物学

ショウジョウバエにおけるプログラムされた細胞死は、発生の早い時期を除けば、主に中枢神経系でおこることが報告されている。私たちは、ショウジョウバエ中枢神経系より培養細胞株を樹立し、クローン細胞株を得た。これらの細胞株の中には、昆虫の神経特異的マーカーとして知られている抗HRP抗体反応性を示し、神経伝達物質と考えられるアセチルコリン、L-dopa、ペプチド、アミノ酸、等を含むものがあることを示した。そこで、これらの細胞をモデル神経細胞として用い、ショウジョウバエにおいてもアポトーシスが起こるか否かを検討した。アポトーシスは、現在のところ、電子顕微鏡観察によるクロマチンの凝集などの形態学的変化と、ヌクレオソーム単位でのDNAの断片化という生化学的特徴によって定義されている。ショウジョウバエ中枢神経系由来クローン細胞株、ML-DmBG2-c2,を用いて、哺乳類細胞においてアポトーシスを誘導することが示されている種々の薬物に対する反応を検討した結果、Ca^<++>イオノフォア(A23187),PKC inhibitor(H-7),Poly(ADP-ribose)polymerase inhibitor(nicotinamide)などを加えることによってDNAのラダーがみられ、哺乳類でのアポトーシスの場合と同様に180-200bp単位でDNAの断片化が起こることがわかった。DNAのラダーの大きさから、おそらく、この断片化はヌクレオソーム単位で起こっていると考えられる。この際、DNAの断片化を伴って死に至る細胞は、発生中の胚でおこる細胞死と同様にAOで染色された。また、電子顕微鏡観察によりクロマチンの凝集も起きているものがあることがわかった。これらの結果から、ショウジョウバエにおいてもDNAの断片化とクロマチンの凝集を伴うアポトーシスが起こると結論された。また、哺乳類の細胞でのアポトーシスには、RNA合成阻害剤(actinomycin-D(AMD)),タンパク合成阻害剤(cycloheximide(CHX))によって抑制されるものがあることが報告されているが、AMD,CHXは、単独でDNAの断片化を誘導することがわかった。今回用いたすべての薬物によるDNAの断片化は、Ca^<++>キレーター(BAPTA)によって抑制された。このことは、アポトーシスの過程のどこかにCa^<++>が関与していることを示している。細胞外液中のCa^<++>を除いた際には、A23187以外の薬物によるDNAの断片化はすべて起こったが、A23187による断片化は抑制された。このことから、A23187は細胞外のCa^<++>を細胞内に流入させることによって断片化を誘導していると考えられる。細胞質内のCa^<++>濃度は、通常低く保たれているはずであるので、A23187以外の薬物によるアポトーシスには、細胞内のどこかに貯蔵されているCa^<++>が必要であると考えられる。Ca^<++>-dependent endonuclease阻害剤であるaurintricarboxyric acid (ATA)を用いると、A23187によるDNAの断片化は阻害されたが、H-7,nicotinamide,AMD,CHXによる断片化は阻害されなかった。また、一般的にendonucleaseはZn^<++>により阻害されるが、A23187による断片化は50μMのZn^<++>によって阻害され、H-7,nicotinamide,AMD,CHXによる断片化は5mMのZn^<++>で阻害され、断片化を阻害するZn^<++>の濃度が異なることがわかった。従って、用いた薬物によってDNAを断片化するendonucleaseは、少なくとも2種類あると考えられる。

The cells die early During the period, the main report of the main central god is the report of the central god. The privately owned and established CNS-derived cultured cell lines, and the クローン cell lines have been established.これらの中には、Insect の神経specific マーカーとして知られているanti-HRP antibody reactivity を Demonstrationし、神経伝The material is made of とられるアセチルコリン, L-dopa, ペプチド, アミノ acid, etc.そこで、これらの片をモデル神経码として用い、ショウジョウバエにおいてもアポトーシスが出こるか不かを検褜した.アポトーシスは, present のところ, electron microscope observation によるクロマチンのagglutination などのmorphological changes Chemistry, ヌクレオソームunit DNA fragmentation というbiochemistry's special 徴によって definition されている.ショウジョウバエcentral nervous system origin: クローン cell line, ML-DmBG2-c2, をいて, mammalian cell line においてアポトーシスをInduced することがshows されているkind 々の薬物に対する Reflection を検検したresult, Ca^<++>イオノフォア(A23187), PKC inhibitor(H-7),Poly(ADP-ribose)polymerase Inhibitor(nicotinamide)などを加えることによってDNAのラダーがみられ、nurturing Dairy products are made of 180-200bp single-digit DNA fragments. DNAのラダーの大きさから、おそらく、この fragmentation はヌクレオソーム単开户こっていると卡えられる. The fragmentation of DNA is accompanied by the death of cells, and the death of cells during embryonic development is caused by the same staining of AO and AO.また、Electronic microscope observation によりクロマチンのagglutination きているものがあることがわかった.これらのRESULTSから、ショウジョウバエにおいてもDNAの fragmentationとクロマチンのagglutination うアポトーシスが出こると Conclusion された.また, mammalian cell でのアポトーシスには, RNA synthesis inhibitor (actinomycin-D (AMD)), タンパク synthesis inhibitor (cyclohexi mide(CHX))によって suppress されるものがあることがreport されているが, AMD, CHX, and single DNA fragmentation are induced. This time, I used DNA fragmentation and Ca^<++>キレーター(BAPTA) to suppress DNA.このことは, アポトーシスのprocess のどこかにCa^<++>が关 and していることを Show している. The Ca^<++> in the extracellular fluid is the fragmentation of DNA except for A23187 and A23187.このことから、A23187はExtracellular Ca^<++>をIntracellular Ca inflowさせることによってfragmentationをinducedしているとKaoえられる. The concentration of Ca^<++> in the cytoplasm is low, and the concentration of Ca^<++> in the cytoplasm is usually low.よるアポトーシスには, intracellular のどこかに蔵されているCa^<++>がessential であると卡えられる. Ca^<++>-dependent endonuclease inhibitor aurintricarboxyric acid (ATA) uses いると, A23187 and によるDNA fragmentation and blocking はされたが, H-7, Nicotinamide, AMD, CHX fragmentation and blocking されなかった. H-7 ,nicotinamide,AMD,CHX is broken into 5mM Zn^<++> and is blocked.従って, use いた薬物によってDNA を fragmentation するendonuclease は, 小なくとも2 kinds of あると考えられる.