運動ニューロンの生存・維持に関わる分子の作用機序の解明と疾病との関連

阐明参与运动神经元存活和维持的分子的作用机制及其与疾病的关系

• 批准号: 15016028
• 负责人: 程 久美子
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016028/
• 关键词: 遺伝子; 神経科学; 脳; 神経; 脳神経疾患; 発生分化; 運動ニューロン; 細胞死

神経細胞は発生の初期に過剰に産生され、分化の過程で約半数が死に至る。このような運動ニューロン自然細胞死に関わる分子、さらには成熟運動ニューロンの分化生存維持に関わる分子を同定し作用機序を解明していくことは、運動ニューロン病を始めとする種々の神経変性疾患発症機構の解明および治療法の開発に結びつくと考える。ニワトリ胚脊髄では、孵卵後4日から10日目の間に、運動ニューロンの自然細胞死がおこり、残った未分化である細胞群が劇的な変化を起こし、神経系としての機能を獲得することが知られている。この期間のニワトリ胚脊髄神経細胞の生存および分化に関与する遺伝子のスクリーニングを行い、新規細胞増殖因子(spinal cord-derived growth factor)を始めとする、数種の興味深い遺伝子を単離した。これらの遺伝子の発現パターンについては、northern blotting法、in situ hybridization法で解析した。さらに、いくつかの遺伝子の相同遺伝子について、マウス脳からのneurosphereを用いた機能解析を行っている。また、私達は、ニワトリの自然細胞死が起こる胚期の運動ニューロン初代培養系に対し生存活性を示す物質を骨格筋から分離精製したが、得られた物質は、タンパクではなく7SL-RNAのニワトリ相同遺伝子であることがわかった。in situ hybridizationの結果は、7SL-RNAは運動ニューロン自然細胞死に関与している可能性を強く示唆するものであった。そこで、7SL-RNAの機能を個体レベルで解析するために、エレクトロポレーション法を用いたin ovo RNA interference法を確立し、検討を行っているが、7SL-RNAのRNAiによるノックダウンにより、細胞死が誘導されることがわかってきている。同様の方法を用いて、これまでクローニングしてきた遺伝子に機能解析も行う準備をしている。

Neurocyte development process in the early stages of production, differentiation process, about half of the time to death. The molecular mechanisms involved in cell death, differentiation, survival and maintenance of mature motor activity are explained. The mechanisms involved in the development of neurologic disorders are explained. The embryonic ridge of the embryo is formed, the natural cell death of the movement is formed, the residual undifferentiated cell population is formed, and the function of the nervous system is acquired. During this period, there are several genes involved in the survival and differentiation of embryonic brain cells, new cell growth factors (spinal cord-derived growth factors), and several interesting genes. The method of northern blotting and in situ hybridization is used to analyze the occurrence of the virus. This is the first time that a neurosphere has been used. The natural cells of the embryo stage were isolated and purified from the cells of the primary culture system. The results of situ hybridization show that 7SL-RNA is highly susceptible to natural cell death. The function of 7SL-RNA was analyzed individually by the method of RNA interference. The results showed that 7SL-RNA could be induced by RNA interference. The same method is used to analyze the function and prepare the operation.

项目成果

程久美子: "培養細胞でのsiRNAによるRNAi法"実験医学別冊 新訂 新遺伝子工学ハンドブック. 243-246 (2003)

Kumiko Hodo：“在培养细胞中使用siRNA的RNAi方法”实验医学特别版新基因工程手册243-246（2003）。

Iwabushi M.: "Molecular cloning and characterization of avian bombesin-like peptide receptors : New tools for investigating molecular bais for ligand selectivity."British J.Pharmacol.. 139. 555-566 (2003)

Iwabushi M.：“禽铃蟾肽样肽受体的分子克隆和表征：研究配体选择性分子基础的新工具。”British J.Pharmacol.. 139. 555-566 (2003)

Kato, M.: "Characterization of voltage-gated calcium currents in gonadotropin-releasing hormone neurons tagged with green fluorescent protein in rats."Endocrinology. 144. 5118-5125 (2003)

Kato, M.：“大鼠促性腺激素释放激素神经元中绿色荧光蛋白标记的电压门控钙电流的表征。”内分泌学。

程久美子: "ポストシークエンス タンパク質実験法4 構造・機能解析の実際"東京化学同人. 15 (2003)

保堂久美子：“后测序蛋白质实验方法4实用结构/功能分析”东京化学同人15（2003）。

Mishima T.: "Expression of DDAH1 in chick and rat embryos"Developmental Brain Research. 148. 223-232 (2004)

Mishima T.：“鸡和大鼠胚胎中 DDAH1 的表达”发育脑研究。