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ピリジルアミノ化法を用いた脳特異的糖鎖の構造解析と脳内分布

使用吡啶胺化方法对脑特异性糖链和脑内分布进行结构分析

基本信息

批准号：
06267212
负责人：
長谷純宏
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06267212/
关键词：
糖鎖脳ピリジルアミノ化法 HPLC 糖蛋白質

项目摘要

本研究ではマウスの神経組織に特徴的に発現している糖鎖を見い出し、その構造決定を行い、糖鎖の発現箇所、発現時期、結合しているタンパク質等を明らかにし、糖鎖の機能探索の第一歩とする。本研究では糖鎖を直接確認出来るピリジルアミノ化法を用いて行うことにした。平成5年度では、マウスの各臓器より得られたピリジルアミノ化糖鎖の糖鎖マップを比較することにより、神経組織に特徴的に発現している2種の糖鎖(BA1とBA2)の構造を決定した。平成6年度ではこれら糖鎖BA1とBA2の発現時期をマスウ脳の発達段階に応じてどの様に変動するかを調べた。このために、生後100日までのマウスの大脳、小脳、脳幹それぞれを凍結乾燥した。各凍結乾燥品をヒドラジン分解(100℃10時間)し、N-アセチル化後ピリジルアミノ化し、過剰の試薬をゲルろ過で取り去り、PA-糖鎖画分を得た。これらをMono Qカラムを用い中性のPA-糖鎖画分を分取し、これをサイズ分画HPLC及び逆相HPLCで分離しBA1,BA2の糖鎖の定量を行い、乾燥重量当たりのモル数で示した。その結果、BA2は生後増加し、7日で最高値に達し、その後減少した。それに対し、BA1は生後から一周齢までは、少量しか存在しなかったが、その後大脳と脳幹で増加し、BA2とほぼ同じ含有量となった。しかし、小脳においては余り増加せず、大脳の25%程度迄増加したにすぎなかった。

This study is the first step to explore the mechanism of glycan formation, the mechanism of glycan structure, the location, time, and quality of glycan formation. This study directly confirmed the sugar lock. In 2005, the structure of two kinds of glycocks (BA1 and BA2) was determined by comparing the characteristics of the brain tissue and the occurrence of glycocks. In 2006, the development period of sugar lock BA1 and BA2 was adjusted. 100 days after birth, they are frozen and dried. Each freeze-dried product was decomposed (100℃ for 10 hours), N-linked, and then separated into PA-linked components. The separation of PA-linked glycans by HPLC and RP-HPLC was carried out in the presence of Mono Q. The separation of PA-linked glycans by HPLC and RP-HPLC was carried out in the presence of dry weight. As a result, BA2 increased after birth, the highest value reached on the 7th, and decreased after birth. A small amount exists after birth, and a large amount increases after birth. In addition, the increase in the number of small and medium enterprises and the increase in the number of large enterprises by 25%.