ピリジルアミノ化法を用いた精密人工複合糖質の作成

吡啶胺化法制备精密人工糖复合物

• 批准号: 09240221
• 负责人: 長谷 純宏
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09240221/
• 关键词: 糖鎖; 糖蛋白質; ピリジルアミノ化; オリゴ糖; 人工複合糖質

ニワトリ卵60個より定法に従いIgYを4g精製した。得られたIgYをサーモリシン消化(60℃,5時間)、続いてプロナーゼで消化(37℃,48時間)を行った。消化物をゲル濾過(Bio-Gel P-2,4.5 X 55cm)にて分離し,アントロン一硫酸法で陽性画分をとりグロコペプチド画分とした。得られたグリコペプチド画分をヒドラジン分解(100℃,10時間)、N-アセチル化、ピリジルアミノ化を行い、糖鎖を遊離・標識し、過剰の反応試薬はクロロフォルム抽出とゲル濾過で除いた。得られたピリジルアミノ化(PA-)糖鎖混合物を0.1M HCIで80℃40分間消化し、シアル酸を外した。さらにβ-ガラクトシダーゼ(jack bean)で加水分解し、アシアロ複合型の糖鎖の一部を脳特異的糖鎖(BA2)の構造に導いた。この標品中には他にも多くのPA-糖鎖が混合しているため、逆相HPLCで精製し、標準糖鎖であるBA2-PAと同じ位置に溶出された画分を分取して、精製されたBA2-PAを得た。分取したBA-2-PAを常圧、室温で3時間接触還元し、上清を濃縮乾固した。残査をヒドラジンで処理(70℃,2分)し、さらにゲル濾過(1X100cm)で精製し、1-アミノ-1-デオキシ誘導体にした。この化合物とホスファチジルグリコールアルデヒドを還元アミノ化反応を用いて結合させた。反応混合物をゲル濾過により精製して、目的の人工複合糖脂質を調製した。得られた人工複合糖脂質の構造は種々の構造解析法を行い確認した。

60 pieces of paper, 4g of paper. Digestion (60℃, 5 hours), digestion (37℃, 48 hours) Digests were separated by filtration (Bio-Gel P-2, 4.5 X 55cm), and the positive fractions were separated by sulfuric acid method. In this paper, the author analyzes the characteristics of sugar chain reaction, such as temperature decomposition (100℃, 10 hours), N-type reaction, sugar chain reaction, sugar chain reaction, The results showed that the sugar chain mixture was digested in 0.1M HCI at 80℃ for 40 minutes, and the acid content was reduced. In addition, a part of the β-glucuronidase (jack bean), which is composed of hydrolysis and hydrolysis complex type, is the structural guidance of the specific glucuronidase (BA2). The standard sample was purified by reverse-phase HPLC, and the standard sample was separated by HPLC. BA-2-PA is extracted at room temperature for 3 hours, and the supernatant is concentrated and dried. The residue was treated at 70℃ for 2 min, filtered at 1x100cm, purified, and induced at 1-min-1-min The compound was used in the chemical reaction. The reaction mixture must be filtered and refined, and the artificial complex sugar lipid must be prepared. The structure of artificial complex sugar lipid was confirmed by structural analysis method.

项目成果

Yanagida,K., Ogawa,H., Omichi,K., and Hase,S.: "Introduction of a New Scale into Reversed-Phase HPLC of Pyridylamino-Sugar Chains for Strcuture Assingment." J.Chromatography. (in press).

Yanagida,K.、Okawa,H.、Omichi,K. 和 Hase,S.：“将新的尺度引入吡啶氨基糖链的反相 HPLC 中以进行结构评估。”

Hase,S.: "Pre-column Derivatization for Chomatographic and Electrophoretic Analysis of Carbohydrates." J.Chromatogr.720. 173-182 (1996)

Hase,S.：“碳水化合物色谱和电泳分析的柱前衍生化”。

長束俊治、長谷純宏: "グライコバイオロジー実験プロトコール" ピリジルアミノ(PA)化法のよる糖鎖の蛍光標識と分離, (1996)

Toshiharu Nagatsuka，Junhiro Hase：“糖生物学实验方案”通过吡啶氨基（PA）转换方法进行糖链的荧光标记和分离，（1996）

Ozaki,Y., Omichi,K. and Hase,S.: "Preparation of Neoglycolioids with a Definite Sugar Chain Moiety from Glycoproteins." Anal.Bicohem.241・2. 151-155 (1996)

Ozaki, Y.、Omichi, K. 和 Hase, S.：“从糖蛋白中制备具有确定糖链部分的新糖苷酸。”Anal.Bicohem.241·2（1996）。

Natsuka,S. and Hase,S.: "Analysis of N-and O-Glycans by Pyridylamination." Methods in Molecular Biology. Vol.XX(in press.).

奈兹卡，S.