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蛍光標識少糖による蛋白質の糖鎖構造認識の解析

使用荧光标记寡糖分析蛋白质碳水化合物链结构识别

基本信息

批准号：
02250224
负责人：
長谷純宏
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02250224/
关键词：
蛍光標識ウズラ酵素マンノシダ-ゼ HPLC

项目摘要

αーマンノシダ-ゼの基質特異性をピリジルアミノ(PAー)糖鎖を基質として用いて解析し、酸素の役割等について調べるため、平成2年度に得られた知見について報告する。1)PAー糖鎖調製のためピリジルアミノ化反応を再検討し、定量的に反応が進行する様にした。2)基質の調製:オボアルブミンや大福豆より21種類のオリゴマンノ-ス型のPAー糖鎖を調製しHPLCで分離する条件が得られた。3)PAー糖鎖を用いた活性測定は次の様に行なった:酸素反応混合物をサイズフラクショネ-ションHPLCで各ピ-クを分取し、各々ピ-クはさらに逆相HPLCで分離して、酸素消化物を固定した。4)ニホンウズラの輸卵管をホモジナイズし、30,000xg上澄を粗酵素液とした。硫安沈殿、DEAEーSephacel,Sephacryl Sー300,mannannーSepharose 4B,hydroxyapatiteカラムクロマトグラフィ-で精製しSDSーPAGEとPAGEで単一のバンドを示す標品を得た。得られた酵素はコバルトイオンを要求し、分子量330,000、至適pH7.0の酵素であった。4)ウズラ中性αーマンノシダ-ゼはManα1ー3,Manα1ー6残基を水解しManα1ー2残基は水解しにくい事が明らかになった。さらに詳細な解析を行なう予定である。

In the second year of Pingcheng, we got the information that we need to know about the situation in the second year of the year, such as the use of chemical analysis, acid cutting, and so on, in the year 2. 1) PA, sugar, glucose, glucose, 2) basic information: the conditions for the separation of PA sugar, sugar and HPLC have been improved. 3) the activity of PA sugar was determined by enzyme activity test: the mixture of acids, the mixture of acids, the separation of HPLC, the separation of reverse phase HPLC, and the immobilization of acid digestants. 4) the oviducts, ovaries, oviducts, oviducts and 30000xg. Thian Dian, DEAEN Sephacel, Sephacryl S "300MANNANG Sepharose 4B HYDROAPTITTY Sepharose 4B HYDROPHYTITE. The standard product has been displayed. The standard product has been obtained by using the SDS PAGE PAGE. The molecular weight of the enzyme was 330000, and the molecular weight of the enzyme was 330000. The enzyme was isolated from pH7.0. 4) Hydrolysis of Man α 1