DNA分断化に変異を持つ神経細胞株での原因遺伝子の検討

检查具有 DNA 片段突变的神经细胞系中的致病基因

• 批准号: 06272236
• 负责人: 澤田 誠
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06272236/
• 关键词: PC12; DNA分断化; 神経細胞死; 細胞周期; アデノウイルス; E1A遺伝子

PC12細胞から分離した細胞が死滅する時にDNAの分断化が起こりにくい亜株PC12FRにアデノウイルス由来のE1A遺伝子を導入することによって障害されていたDNAの分断化が回復した細胞を用いてアポトーシスで見られるDNA分断化に関わる細胞内の因子またはその遺伝子を同定分離することを目的で以下の実験を行った。1)PC12FRは親株のPC12に較べて増殖性が昂進していた。E1A遺伝子を導入したPC12FRではさらに増殖性が昂進した。いろいろな成長因子、サイトカインの作用を調べたところNGFとbFGFに細胞死の抑制成果がみられた。またTNFはE1A遺伝子導入による細胞死を促進することがわかった。2)E1Aの作用を増強したり拮抗したりする遺伝子や、細胞死に関与することが示唆されている遺伝子の変動を調べたりこれら遺伝子のうちクローン化されたものを導入して効果を調べた。使用した遺伝子の中でアデノウイルス由来E1B遺伝子がE1Aの作用を抑制した。さらにE1B遺伝子は親株のPC12やマウス中枢神経細胞株のN18やN1E115の細胞死も抑制した。3)E1Aタンパクに対する抗体でE1A導入細胞の抽出液を免疫沈降し結合している分子を分離し同定することを試みた。E1A遺伝子産物の免疫沈降で共沈するタンパクとしてはcdkやサイクリンなどの細胞周期の調節に関与する因子が検出できたが、p53などの細胞死を誘導する因子の共沈は現在までのところ確認できなかった。以上の結果から演者らの作製したシステムでは細胞周期に関与した因子が細胞死の決定に重要な役割を果たしていることが考えられる。

PC12 cells were isolated and DNA fragmentation was initiated when the cells were killed. PC12 FR cells were isolated and DNA fragments were introduced into the cells. 1) PC12 FR is more fertile than PC12. E1A gene is introduced into PC12FR, but its reproduction is increasing. The effect of growth factor and bFGF on cell death is regulated. TNF-α gene is introduced into the cell to promote cell death. 2) E1A plays an increasingly important role in the regulation of cell death and cell proliferation. The use of E1B to suppress the effects of E1A The E1B gene was inhibited by cell death in PC12 and N1E115 cells. 3) E1A antibody is introduced into the extract of E1A cells, and the molecules are isolated and stabilized. E1A gene product immune precipitation and co-precipitation of cdk and p53 related cell cycle regulation factors and apoptosis induction factors The above results are related to cell cycle factors and cell death decisions.