HMGタンパク質のDNA結合ドメイン構造と認識機構の解析

HMG蛋白DNA结合域结构及识别机制分析

• 批准号: 06276217
• 负责人: 吉田 充輝
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06276217/
• 关键词: HMG1タンパク質; HMG2タンパク質; DNA結合性タンパク質; HMG box; 転写調節因子; クロマチン

〔1〕HMG1およびHMG2単独DNA結合領域の構造解析:HMG1,HMG2のcDNAのうち、それぞれのドメインAおよびドメインBをコードする領域を発現ベクター(pGEM-EX)のT7プロモーターの下流に挿入し、大腸菌BL21株で高発現させ、均一になるまで精製することに成功した。さらに、一次構造とDNA結合能を有することを確認した。現在、高次構造の解析を大阪大学蛋白質研究所の協力のもとにNMRにより、また奈良技術大学院大学の協力のもとにX線解析により進めている。〔2〕DNA結合領域、ドメインA+Bの構造解析:HMG1,HMG2のcDNAより、ドメインA+Bをコードする領域を同様に発現ベクターに挿入し、大腸菌で高発現させ、均一になるまで精製することに成功した。さらに、一次構造とDNA結合能を有することを確認した。今後、上記の解析結果を参考にしながら、高次構造の解析を大阪大学蛋白質研究所の協力のもとにNMRにより、また奈良技術大学院大学の協力のもとにX線解析により進める予定である。〔3〕表面プラズモン共鳴技術(BIAcore System)を用いたDNA結合領域とDNAとの相互作用の解析:上記のDNA結合領域A,B,A+Bに加えてそれらを結ぶリンカー(l)をもつAl,Bl,AlBlを同様に調製した。これらとDNAとの相互作用をBIAcore Systemを用いて検索した。その結果、リンカー領域がHMG1,HMG2の立体構造保持と結合強化に重要であり、また結合が多段階反応であることが明らかとなった。

[1] HMG1 お よ び HMG2 単 alone the dna-binding domain の structure: HMG1, HMG2 の cDNA の う ち, そ れ ぞ れ の ド メ イ ン A お よ び ド メ イ ン B を コ ー ド す る field を 発 now ベ ク タ ー (pGEM - EX) の T7 has プ ロ モ ー タ ー の obscene に scions into し, coliform BL21 strain で high 発 now さ せ Uniform になるまで refined する とに とに successful た た. Youdaoplaceholder0, the one-time construction of とDNA binding energy を is confirmed by する する とを とを and た た. Now, high order structure analytical を の Osaka university institute of protein の together の も と に NMR に よ り, ま た nara technology university college の together の も と に X-ray analytical に よ り into め て い る. (2) DNA binding domain, ド メ イ ン の structure: A + B HMG1, HMG2 の cDNA よ り, ド メ イ ン A + B を コ ー ド す を る field with others に 発 now ベ ク タ ー に scions into し, coliform で high 発 now さ せ, uniform に な る ま で refined す る こ と に success し た. Youdaoplaceholder0, the one-time construction of とDNA binding energy を is confirmed by する する とを とを and た た. In the future, written の analytical results を reference に し な が ら, higher order structure analytical を の Osaka university institute of protein の together の も と に NMR に よ り, ま た nara technology university college の together の も と に X-ray analytical に よ り into め る designated で あ る. (3) the surface プ ラ ズ モ ン resonance technology (BIAcore System) を い た dna-binding domain と DNA と の interaction の analytic: written の dna-binding domain. A, B, A + B に plus え て そ れ ら を "ぶ リ ン カ ー (l) を も つ Al, Bl, AlBl を with others に modulation し た. The <s:1> れらとDNAと <s:1> interaction をBIAcore Systemを is used with て検 て検 to determine た. そ の results, リ ン カ ー field が HMG1, HMG2 の three-dimensional structure keep と combination strengthening に important で あ り, ま た inverse が Duan Jie more 応 で あ る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

Watanabe et al.: "Stimulation of DNA-dependent protein kinase activity by high mobility group proteins 1 and 2." Biochem.Biophys.Res.Commun.202. 736-742 (1994)

Watanabe 等人：“高迁移率族蛋白 1 和 2 刺激 DNA 依赖性蛋白激酶活性。”

Aizawa et al.: "Stimulation of transcription in cultured cells by high mobility group protein 1:essential role of the acidic carboxyl-terminal region." Biochemistry. 33. 14690-14695 (1994)

Aizawa 等人：“高迁移率基团蛋白 1 刺激培养细胞中的转录：酸性羧基末端区域的重要作用。”