HMGタンパク質のDNA結合機構および機能解析研究

HMG蛋白DNA结合机制及功能分析研究

• 批准号: 06680592
• 负责人: 吉田 充輝
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680592/
• 关键词: HMG1タンパク質; HMG2タンパク質; DNA結合性タンパク質; HMGbox; 転写調節因子; クロマチン

1.HMG2のDNA結合領域の構造解析:HMG2のcDNAより、ドメインA、B、さらにA+Bをコードする領域を発現ベクター(pGEM-EX)のT7プロモーターの下流に挿入し、大腸菌BL21株で高発現させ、均一になるまで精製することに成功した。さらに、一次構造とDNA結合能を有することを確認した。現在、高次構造の解析を大阪大学蛋白質研究所の協力のもとにNMRにより、また奈良技術大学院大学の協力のもとにX線解析により進めている。2.HMG1の転写促進機構解析系の確立:ウシ・パピローマ・ウイルス遺伝子を持つプラスミド(pBPV)にHMG1、HMG2のcDNAを組み込み、マウス由来のC127細胞へ導入、種々の選択をへてHMG1およびHMG2高発現細胞を得ることに成功した。この細胞に種々のプロモーター、および遺伝子を持つレポータープラスミドを導入しその発現を見たところ、HMG1高発現細胞ではそれらが促進され、またそのクロマチン構造が弛緩していたが、HMG2高発現細胞では促進は見られなかった。これらの結果よりHMG1がクロマチン構造の弛緩を介して転写を促進すること、およびHMG1とHMG2が異なる機能をもつことが明らかとなった。3.HMG2cDNAに対するアンチセンスRNA発現に伴う細胞周期・増殖の変動:デキサメサゾン誘導によりHMG2cDNAに対するアンチセンスRNAを発現できるプラスミドを構築、ラット繊維芽細胞3Y1へ導入し、ホルモン添加によりHMG2アンチセンスRNAを発現誘導できる細胞株を樹立した。しかし、発現するアンチセンスRNA量が少なく、その後の解析は困難であった。そこで、上記で構築したHMG2高発現細胞をもちいて細胞周期、増殖の制御におけるHMG2タンパク質の役割解析を進めている。

1. Structural analysis of DNA binding domain of HMG2: cDNA fragment of HMG2, DNA fragment A, DNA fragment B, DNA fragment A+ DNA fragment B, cDNA fragment B + DNA fragment A+ DNA fragment B, cDNA fragment A+ DNA fragment B fragment B, cDNA fragment A + DNA fragment B fragment B, cDNA fragment A + DNA fragment A + DNA fragment B fragment B, cDNA fragment B fragment A + DNA fragment B fragment B, cDNA fragment A + DNA fragment A + DNA fragment B fragment B fragment First, the structure of DNA binding energy has been confirmed. Now, cooperation in NMR and X-ray analysis at Osaka University Protein Research Institute and Nara University of Technology 2. The establishment of HMG1 gene promoter mechanism analysis system: HMG1 and HMG2 cDNA assembly, gene selection, and HMG1 and HMG2 gene expression in C127 cells. These cells are highly developed, and HMG1 cells are highly developed, but HMG2 cells are highly developed, and HMG1 cells are highly developed, and HMG2 cells are highly developed. As a result, HMG1 and HMG2 have different functions. 3. HMG2 cDNA expression is associated with cell cycle and proliferation: cell line induction is associated with HMG2 cDNA expression, cell line construction is associated with HMG2 cDNA expression, and cell line induction is associated with HMG2 cDNA expression. However, the amount of RNA detected was very small, and subsequent analysis was difficult. HMG2 high-level cell cycle, proliferation control, and qualitative analysis

项目成果

Shirakawa et al.: "Existence of a transcription factor for the human HMG2 gene positively related to the level of HMG2 mRNA in the cells." Biochemistry. 34(in press). (1995)

Shirakawa 等人：“人类 HMG2 基因转录因子的存在与细胞中 HMG2 mRNA 的水平呈正相关。”

Watanabe et al.: "Stimulation of DNA-dependent protein kinase activity by high mobility group proteins 1 and 2." Biochem.Biophys.Res.Commun.202. 736-742 (1994)

Watanabe 等人：“高迁移率族蛋白 1 和 2 刺激 DNA 依赖性蛋白激酶活性。”

Aizawa et al.: "Stimulation of transcription in cultured cells by high mobility group protein 1:essential role of the acidic carboxyl-terminal region." Biochemistry. 33. 14690-14695 (1994)

Aizawa 等人：“高迁移率基团蛋白 1 刺激培养细胞中的转录：酸性羧基末端区域的重要作用。”

Tanabe et al.: "Identification and functional analysis of DNA-binding region in HMG2 protein" Nucleic Acids Sym.Ser.31. 219-220 (1994)

Tanabe 等人：“HMG2 蛋白中 DNA 结合区域的鉴定和功能分析”核酸 Sym.Ser.31。

Ogawa et al.: "Stimulation of transcription accompanying relaxation of chromatin structure in cells over-expressing HMG1 protein." J.Biol.Chem.270(in press). (1995)

Okawa 等人：“在过度表达 HMG1 蛋白的细胞中，转录刺激伴随着染色质结构的松弛。”