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核蛋白質による十字型DNA構造の特異的識別・結合の様式および同構造解消の機構

核蛋白对十字形DNA结构的特异性识别、结合方式及其溶解机制

基本信息

批准号：
02263212
负责人：
吉田充輝
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.(1)DNAに対するHMG1,HMG2(HMGと略)タンパク質の結合の度合を測定するために、ゲルシフト・アッセイ法の条件を設定した。(2)この系を用いて解析の結果、HMGはI型DNAに最も親和性が高く、Ir、II型の共存下では、I型がほぼ飽和するとIr型,II型へも結合した。III型とI型DNA共存下では、まずI型に優先的に結合した。III型DNAに結合しているHMGも後にI型DNAを加えると、I型DNAへ移行した。(3)十字型構造をとり1本鎖ル-プを持つものと、持たないものとの2種類の合成DNAをもちいて解析の結果より、HMGは1本鎖グル-プ構造により高い親和性を持つことが明らかとなった。(4)これらの結果から、HMGは塩基配列には依存せず、1本鎖領域を認識結合した後、2本本鎖部分へ協同的に結合するものと推察される。2.一次構造上相同性が高いHMG1とHMG2についてDNAへの結合の度合は大きく異なることがゲルシフト・アッセイの結果で明らかとなり、異なる機能をもつことも考えられる。3.HMG1タンパク質のプロテア-ゼ,あるいはBrCN分解断片とDNAとの相互作用の解析から,HMG1のDNA結合領域のひとつは、N末端より74番目のアミノ酸までの領域にあることが確かめられた。4.DNAとHMGとの結合構造を解析する為に、DNA結合ドメインを高発現させる条件を設定しつつある。HMGのDNA認識・結合の様式は従来のそれらとは全く異なる新しいモチ-フであることが予想され、新知見を得ることができるものと考えられる。5.HMG2の遺伝子領域(約5Kbp)をクロ-ニングし、その全塩基配列をはじめて明らかにし、新しい知見が得られた。この結果は、今後の研究に重要な基盤を与える。

1. (1)DNA binding conditions for HMG1,HMG2(HMG omitted) (2)The results showed that HMG had the highest affinity for type I DNA, Ir, type II DNA, type I DNA, Ir and type II DNA. Type III and type I DNA co-exist, but type I DNA co-exists preferentially. Type III DNA binds to HMG and then type I DNA binds to HMG and then type I DNA migrates. (3)The cross type structure is composed of two kinds of synthetic DNA, one kind of lock and one kind of high affinity structure. (4)The results show that HMG has the following characteristics: 1. the combination of local knowledge and 2. the combination of local knowledge and 2. the combination of local knowledge and 2. 2. The primary structural identity is high. HMG1 and HMG2 are closely related to DNA binding. The degree of DNA binding is different. The result is clear. 3. HMG1 DNA binding domain: DNA binding domain: DNA binding domain: 4. The binding structure of DNA and HMG is analyzed. The conditions for high occurrence of DNA binding are set. HMG's DNA recognition and binding formula are different from each other, new to each other, new to each other. 5. HMG2's genetic subdomain (about 5Kbp) is composed of two parts: the first part and the second part. The results are important for future research.