核蛋白質による十字型DNA構造の特異的識別・結合の様式および同構造解消の機構

核蛋白对十字形DNA结构的特异性识别、结合方式及其溶解机制

基本信息

批准号：
02263212
负责人：
吉田充輝
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.(1)DNAに対するHMG1,HMG2(HMGと略)タンパク質の結合の度合を測定するために、ゲルシフト・アッセイ法の条件を設定した。(2)この系を用いて解析の結果、HMGはI型DNAに最も親和性が高く、Ir、II型の共存下では、I型がほぼ飽和するとIr型,II型へも結合した。III型とI型DNA共存下では、まずI型に優先的に結合した。III型DNAに結合しているHMGも後にI型DNAを加えると、I型DNAへ移行した。(3)十字型構造をとり1本鎖ル-プを持つものと、持たないものとの2種類の合成DNAをもちいて解析の結果より、HMGは1本鎖グル-プ構造により高い親和性を持つことが明らかとなった。(4)これらの結果から、HMGは塩基配列には依存せず、1本鎖領域を認識結合した後、2本本鎖部分へ協同的に結合するものと推察される。2.一次構造上相同性が高いHMG1とHMG2についてDNAへの結合の度合は大きく異なることがゲルシフト・アッセイの結果で明らかとなり、異なる機能をもつことも考えられる。3.HMG1タンパク質のプロテア-ゼ,あるいはBrCN分解断片とDNAとの相互作用の解析から,HMG1のDNA結合領域のひとつは、N末端より74番目のアミノ酸までの領域にあることが確かめられた。4.DNAとHMGとの結合構造を解析する為に、DNA結合ドメインを高発現させる条件を設定しつつある。HMGのDNA認識・結合の様式は従来のそれらとは全く異なる新しいモチ-フであることが予想され、新知見を得ることができるものと考えられる。5.HMG2の遺伝子領域(約5Kbp)をクロ-ニングし、その全塩基配列をはじめて明らかにし、新しい知見が得られた。この結果は、今後の研究に重要な基盤を与える。

1.（1）为了测量HMG1的结合程度，HMG2（缩写为HMG）蛋白与DNA的结合，设置了凝胶移位测定的条件。（2）使用该系统进行分析表明，HMG对I型DNA具有最高的亲和力，并且在IR和II的共存中，当I型几乎饱和时，它也与IR和II型一样。在存在III型和I型DNA的情况下，首先，结合与I类型I优先结合。与III型DNA结合的HMG稍后通过添加I型DNA将其转移至I型DNA。（3）分析结果表明，由于单链组结构，HMG具有高亲和力，具有两种类型的合成DNA，一种带有单链LUP，一个没有。（4）从这些结果中，估计HMG不取决于基本序列，并且在单链区域的识别和结合后，它合作结合了双链部分。 2。凝胶转移测定的结果表明，具有高主要结构同源性的HMG1和HMG2与DNA的结合程度显着不同，并且可能具有不同的功能。 3。对HMG1蛋白与DNA的蛋白酶或BRCN降解片段之间的相互作用的分析证实，HMG1的DNA结合区域之一位于该区域，直至N末端的第74氨基酸。 4。为了分析DNA和HMG之间的结合结构，正在设置DNA结合结构域高表达的条件。可以预期，HMG的DNA识别和结合模式与常规的基序完全不同，并且可以获得新的发现。 5。克隆了HMG2的基因区域（约5 kbp），首次揭示了整个碱基序列，从而导致了新的发现。该结果为将来的研究提供了重要的基础。