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核タンパク質による十字型DNA構造の特異的識別・結合の様式および同構造解消の機構

核蛋白对十字形DNA结构的特异性识别和结合方式及其溶解机制

基本信息

批准号：
03259214
负责人：
吉田充輝
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至 1991
项目状态：
已结题

项目摘要

1.HMG1,HMG2の一次構造上のDNA結合部位の同定:HMG1タンパク質を化学および酵素分解後、ペプチドを分離し、DNA結合能を測定した。この結果と一次構造、および最近見いだされたHMGタンパク質類似のDNA結合ドメインをもつタンパク質との比較により、結合に必要な2つの領域をほぼ特定できた。2.HMG1とHMG2のDNAへの親和性の差異の検索:前年度の研究によりゲルシフト・アッセイでHMG1,2の間にDNA結合能の大きな差異が認められた。この差異がリン酸化に由来するか否かを検索する為、脱リン酸化処理を行い、DNA結合能を比較したところ変化は認められなかった。他の結果と併せて考えると、DNA結合能の差異は両タンパク質の修飾によるのではなく、一次構造に起因するものと推定される。3.DNAとHMG2複合体の立体構造:HMG2タンパク質の上記2つの結合領域のうち、ドメインAをコ-ドするcDNAの塩基配列をPーガラクトシダ-ゼのcDNAの下流への連結し、P_Rプロモ-タ-をもつプラスミドへ挿入、大腸菌ヘトランスフォ-ムした。誘導によって高発現した融合タンパク質を分離精製後、ドメインAを酵素分解により切出し、分離精製する系を確立できた。今後、NMRおよびX線結晶回析を行い、DNA結合領域の立体構造解析を進める。4.HMG2遺伝子構造と発現制御領域の検索:ヒトHMG2遺伝子の単離にはじめて成功し、全塩基配列を決定した。この遺伝子の発現に必要な上流配列を特定し、その領域に結合する核内因子の存在を認め、結合配列を決定した。その発現促進の機構を検索中である。

1. Identification of DNA binding sites in primary structure of HMG1 and HMG2: determination of DNA binding energy after chemical and enzymatic decomposition of HMG1 The results of this study include: 1. Structure, 2. Recent observations: HMG, 2. DNA binding, 3. DNA binding, 4. DNA binding, 4. DNA binding, 4 2. The differences in DNA binding affinity between HMG 1 and HMG 2 were investigated. The difference in DNA binding energy between the two groups was identified. The results show that the difference in DNA binding energy is due to the modification of DNA and the primary structure. 3. The three-dimensional structure of DNA and HMG2 complex: the binding domain of HMG2 complex, the base alignment of HMG2 complex cDNA, the downstream linkage of HMG2 complex cDNA, and the downstream linkage of HMG2 complex cDNA. After induction, fusion and purification, enzyme decomposition, isolation and purification are established. In the future, NMR and X-ray crystallographic analysis will be carried out, and the three-dimensional structure analysis of DNA binding will be carried out. 4. HMG2 gene structure and development control domain realization: HMG2 gene separation and development success, full base alignment determination. The presence of nuclear factors, the identification of binding sequences, and the identification of binding sequences are necessary for the development of these genes. A search for a mechanism to promote development is underway.