HMGタンパク質のDNA結合ドメイン構造と認識機構の解析

HMG蛋白DNA结合域结构及识别机制分析

• 批准号: 07268219
• 负责人: 吉田 充輝
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07268219/
• 关键词: HMG1タンパク質; HMG2タンパク質; DNA結合性タンパク質; クロマチン; 表面プラズモン共鳴; ヌクレオソーム; タンパク質工学

1、HMG2のDNA結合領域の構造解析:HMG2のcDNAより、DNA結合ドメインAおよびB、さらにAB(AとBがリンカーを挟んで連結した配列)をコードする配列を発現ベクターに挿入し、大腸菌内で高発現させ、均一になるまで精製する系を確立した。現在、この系を用いて標識した試料につき、大阪大学蛋白質研究所など3研究機関の協力のもと、NMRにより高次構造解析を進行中であり、基礎データを順調に蓄積しつつある。引き続き解析を継続する。また、奈良先端技術大学院大学の協力のもとにX線回折による解析も同時に進行中である。2、表面プラズモン共鳴(SPR)センサ、蛍光測定を用いたHMGタンパク質とDNAとの相互作用の解析:上記の方法でDNA結合ドメインを含む各種配列を高発現、精製した。それらとDNAとの相互作用を、表面プラズモン共鳴現象を測定するBIAcore(Pharmacia)装置を用いて解析をおこない、各DNA結合ドメインに連なる塩基性配列が強い結合と安定性に重要であることを定量的に明かにした。さらに蛍光測定法をもちいた解析より、各芳香族アミノ酸の存在状態を明らかにできた。3、HMGタンパク質によるDNA bending機構の解析:種々の長さをもつBending,Non-bending型のDNAを作成、これらを用いてHMG中のDNAの折れ曲がり反応の機能ドメインを解析、DNA結合ドメインBとそれに連なる配列が機能領域であることを明らかにした。

1. Structural analysis of HMG2's DNA binding domain: HMG2's cDNA binding domain, DNA binding DNA binding domain AおよびB, and DNA binding domain AB (AとBがリンカーを抟んでconnectionした配array) をコードする配arrayを発行ベクターにINSERTし, the presence of high levels of coliform bacteria, the homogeneous and refined system, and the establishment of the system. Now, we are cooperating with the Osaka University Protein Research Institute Nana 3 Research Institute to use the Nana logo to test samples.のもと, NMR によりHigher order structure analysis をIn progress であり, Basic データをSynchronization and accumulation しつつある. Hingき続きanalyticsを継続する.また, Nara Advanced Institute of Technology's collaborative effort to analyze X-rays is currently underway. 2. Surface Pulmonary Resonance (SPR) sensor, HMG HMG sensor and DNA sensor are used for photometric measurement. Analysis of the interaction: The above-mentioned method is used to combine DNA with various combinations and is highly refined and refined. Measurement of DNA interaction and surface resonance phenomenon using BIAcore (Pharmacia) device It is important to analyze the strong binding and stability of each DNA binding link and the basic arrangement of each DNA binding link, and to quantify the linkage of the link. The をもちいた analysis of より and the existence state of each aromatic アミノ acid is based on the をもちいた method. 3. HMG DNA Analysis of the bending mechanism: kind of long bending, non-bending type DNA making, using HMGのDNA's folding function analysis, DNA binding function The functional area of インBとそれに连なる is matched with the functional field であることを明らかにした.

项目成果

Shirakawa, H.: "Existence of a transcription factor for the human HMG2 gene positively related to the level of HMG2" Biochemistry. 34. 2521-2527 (1995)

Shirakawa, H.：“人类 HMG2 基因转录因子的存在与 HMG2 水平呈正相关”生物化学。

Yamazaki, F.: "Repression of cell cycle progression by antisense HMG2 RNA." Biochem. Biophys. Res. Commun.210. 1045-1051 (1995)

Yamazaki, F.：“反义 HMG2 RNA 抑制细胞周期进程。”

Yamamoto, A.: "Difference in affinity for DNA between HMG proteins 1 and 2 determined by surface plasmon resonance measurements." Biochemistry. 35(in press). (1996)

Yamamoto, A.：“通过表面等离子共振测量确定 HMG 蛋白 1 和 2 之间对 DNA 亲和力的差异。”