造血系構築とくにマクロファージ分化におけるIL-6シグナルの解析

IL-6信号在造血系统构建尤其是巨噬细胞分化中的分析

• 批准号: 06277211
• 负责人: 松田 正
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06277211/
• 关键词: IL-6; gp130; Jak; STAT; チロシンキナーゼ; Sak

IL-6は造血系において、IL-6は、IL-3とともに多能性幹細胞コロニー形成を誘導し、巨核球に対してはその成熟化を誘導する。また、IL-6はマウスの骨髄性白血病細胞株M1のマクロファージへの分化を誘導する因子として注目されている。IL-6受容体は分子量80kDaのIL-6結合分子とそのシグナル伝達分子であるgp130により構成される。gp130分子の細胞内ドメインにはチロシンキナーゼ等のエフェクター分子に類似した構造は認められず、gp130分子を介するシグナル伝達系を明らかにするためにはgp130会合分子の同定は必須である。申請者らは非受容体型チロシンキナーゼであるJAKファミリーキナーゼならびにその下流に存在すると考えられるSTAT分子に注目し、それらに対する特異的抗体を用いた免疫沈降法にてIL-6刺激によるチロシンリン酸化の有無を検討した。JAKキナーゼ及びSTAT蛋白に対する抗体は合成ペプチドをウサギに免疫することにより得た。マウスgp130分子を高発現させたマウスプロB細胞株BAFm130細胞あるいはIL-6によってマクロファージへの分化が誘導されるY6細胞をIL-6と可溶性IL-6レセプターa鎖で刺激し、NP-40溶液で可溶化後、抗ホスホチロシン抗体あるいは抗JAK抗体、抗STAT抗体で免疫沈降したのち抗ホスホチロシン抗体によるウエスタンブロットを行った。BAFm130においたはgp130分子を刺激することにより種々の蛋白のチロシンリン酸化が誘導された(BBRC200:821,1994)。また、gp130刺激でJAKキナーゼとSTAT分子のチロシンリン酸化が観察された。さらに、JAKキナーゼは構成的にgp130分子に会合していることが明らかとなった。加えて、抗STAT抗体による免疫沈降物中には分子量72kDaの新たなチロシンキナーゼ(p72^<sak>)(p72STAT-associatcd tyrosinc kinasc)が含まれることを明らかにした。また、p72^<sak>のチロシンキナーゼ活性はgp130刺激で上昇することを明らかにした(Blood83:3457,1994)。さらに、p72^<sak>チロシンキナーゼのチロシンリン酸化はIL-6によってマクロファージへの分化が誘導されるY6細胞においてもチロシンリン酸化が誘導されることや他の造血系サイトカインであるIL-3やG-CSFによっても誘導されることから造血系サイトカインレセプター下流に共通に存在するチロシンキナーゼであると考えられる。現在、このp72^<sak>のチロシンキナーゼの単離、精製を試みている。

IL - 6 は hematopoietic system に お い て, IL - 6 は, IL - 3 と と も に pluripotent stem cells コ ロ ニ ー formation induced を し, giant nuclear ball に し seaborne て は そ の is matured を induced す る. ま た, IL - 6 は マ ウ ス の bone marrow leukemia cell line M1 の マ ク ロ フ ァ ー ジ へ を の differentiation inducing す る factor と し て attention さ れ て い る. IL - 6 by let body は molecular weight 80 kda の IL - 6 combined with molecular と そ の シ グ ナ ル 伝 operatives で あ る gp130 に よ り constitute さ れ る. Gp130 molecular の intracellular ド メ イ ン に は チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ etc. の エ フ ェ ク タ ー molecular に similar し た tectonic は recognize め ら れ ず, gp130 molecular を interface す る シ グ ナ ル 伝 da を and Ming ら か に す る た め に は gp130 molecular の rendezvous with は set must be で あ る. Applicants ら は than by capacity size チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ で あ る JAK フ ァ ミ リ ー キ ナ ー ゼ な ら び に そ の obscene に exist す る と exam え ら れ る STAT molecular に attention し, そ れ ら に す seaborne を る specific antibody with い た immune sink method に て IL - 6 stimulus に よ る チ ロ シ ン リ ン acidification の presence of を beg し 検 た. JAK キ ナ ー ゼ and び STAT protein に す seaborne る antibody は synthetic ペ プ チ ド を ウ サ ギ に immune す る こ と に よ り た. High molecular を マ ウ ス gp130 発 now さ せ た マ ウ ス プ ロ B cell lines BAFm130 cells あ る い は IL - 6 に よ っ て マ ク ロ フ ァ ー ジ へ が の differentiation inducing さ れ る Y6 cells を IL - 6 と soluble IL - 6 レ セ プ タ ー a lock で stimulus し で can be melted, the NP - 40 solution, resisting ホ ス ホ チ ロ シ ン antibody あ る い は JAK resistance, resistance to STAT で immune antibodies sink し た の ち resistance ホ ス ホ チ ロ シ ン antibody に よ る ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト を line っ た. BAFm130 に お い た は gp130 molecular を stimulus す る こ と に よ り kind 々 の protein の チ ロ シ ン リ ン acidification induced さ が れ た (BBRC200:821199 4). Youdaoplaceholder0 and gp130 stimulate でJAKキナ また ゼと ゼとSTAT molecules チロシ チロシ リ リ で acidify が観 observe された. さ ら に, JAK キ ナ ー ゼ は consisting of に gp130 molecules meet に し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. Add え て, STAT antibody に よ る immune sink in に は molecular weight 72 kda の new た な チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ (p72 ^ < sak >) (p72STAT - associatcd tyrosinc kinasc) contains が ま れ る こ と を Ming ら か に し た. ま た, p72 ^ < sak > の チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ active は gp130 stimulate rising で す る こ と を Ming ら か に し た (Blood83:3457199 4). さ ら に, p72 ^ < sak > チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ の チ ロ シ ン リ ン acidification は IL - 6 に よ っ て マ ク ロ フ ァ ー ジ へ が の differentiation inducing さ れ る Y6 cells に お い て も チ ロ シ ン リ ン acidification induced さ が れ る こ と や he の hematopoietic system サ イ ト カ イ ン で あ る IL - 3 や g-csf に よ っ て も induced さ れ る こ と か ら Hematopoietic system サ イ ト カ イ ン レ セ プ タ ー obscene に に exist common す る チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ で あ る と exam え ら れ る. Now, <s:1> <s:1> p72^<sak> <s:1> チロシ キナ ゼ ゼ 単 単 separate and refine を test みて る る る.

项目成果

Iwano,M.,et al.: "Urinary levels of IL-6 in patients with active lupus nephritis." Clin.Nephrology. 40. 16-21 (1993)

Iwano,M.,et al.：“活动性狼疮肾炎患者的尿液 IL-6 水平。”

Fukatsu,A.,et al.: "Distribution of interleukin 6in normal and diseased human kidney." Lad.Invest.65. 61-66 (1991)

Fukatsu,A.,et al.：“白细胞介素 6 在正常和患病人类肾脏中的分布。”

Matsuda,T.,et al.: "Establishmentofthe ELISA for murine soluble gp130,a signal transducer for the IL-6 family cytokine and its detection in the ascitic fluids of tumor-dearing mice." Biochem.Biophys.Res.Comm.202. 637-642 (1994)

Matsuda, T., et al.：“小鼠可溶性 gp130（IL-6 家族细胞因子的信号转导器）的 ELISA 建立及其在肿瘤小鼠腹水中的检测。”

Suematsu,S.,et al.: "Generation of transplantable plasmacytomas with t(12;15)in IL-6 transgenic mice." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. 232-235 (1992)

Suematsu,S.,et al.：“在 IL-6 转基因小鼠中使用 t(12;15) 生成可移植性浆细胞瘤。”