シナプス後肥厚部(PSD)特異的蛋白質の検索と機能解析

突触后增厚区 (PSD) 特异性蛋白的搜索和功能分析

• 批准号: 12053249
• 负责人: 祖父江 憲治
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12053249/
• 关键词: シナプス後肥厚部; ロイシンジッパー; EVH1ドメイン; 代謝性グルタミン酸受容体; dendritic spine; dendritic shaft; クラスター形成; モノクローナル抗体

PSD(シナプス後肥厚部)のダイナミックにして特徴的形態を形成する物質根拠とそのメカニズムを追究するべく、PSD特異的モノクローナル抗体を用いたPSD構成蛋白質の検索とその機能解析を本研究の目的とした。1)モノクローナル抗体によるPSD構成蛋白質の検索分子量800kD〜25kDの30種類の蛋白質に対するモノクローナル抗体を用いてイムノスクリーニングにより検索を進行中で、3種類の新現蛋白質をクローニングし、4種類のPSDに局在する既知蛋白質を同定した。2)PSD-Zip45の機能解析N末側にEVH1ドメイン、C末側に特有のロイシンジッパー・モチーフを有する蛋白質をクローニングし、PSD-Zip45と名づけた。EVH1ドメインはI型代謝性グルタミン酸受容体(mGluR1およびmGluR5)と結合し、ロイシンジッパー・モチーフは強力な自己多量体形成能を示す。そこで、COS7細胞共発現系を用いて、PSD-Zip45によるmGluR1αクラスター形成を証明した。また、シナプスへのPSD-Zip45ターゲッティング機構を解明した。さらにPSD-Zip45の新たな機能を解析する目的で、yeast-two hybrid法によりPSD-Zip45結合蛋白質の検索を用い、新規2蛋白質と既知3蛋白質をクローニングした。3)PSD-Zip70の機能解析C末側にロイシンジッパー・モチーフとコイルドコイル構造を有する新規蛋白質をクローニングし、dendritic spineおよびshaftに局在することを明らかにした。

The shape of the hypertrophic part of the PSD (the fat part of the body) is formed. The root cause of the disease is to investigate the disease. The antibody of the PSD is used to analyze the protein by PSD. The purpose of this study is to analyze the results. 1) the molecular weight of PSD protein is 30, the molecular weight of 800kD~25kD, 30, the molecular weight of protein, the molecular weight of protein, the molecular weight, the molecular weight, the molecular weight 2) the PSD-Zip45 machine can be used to analyze the information of the N terminal, the C terminal, and the specific information of the C terminal. There are some information about protein, and the name of PSD-Zip45. The combination of type I mGluR1 substitutive acid acceptor (mGluR1 receptor acid mGluR5) and the formation of multiple body energy was demonstrated by the combination of type1 receptor acid receptor (AAA). The cells of COS7 and COS7 are used to form a clear picture with the help of mGluR1 alpha cells. Please tell me that the PSD-Zip45 has to be explained by the organization. The new PSD-Zip45 assay was used to analyze the target protein, the yeast-two hybrid method was used to analyze the PSD-Zip45 binding protein, and the new regulation 2 protein was used to analyze the 3 proteins. 3) at the end of the day, the PSD-Zip70 machine will be able to analyze the information in the end of the computer. There are some information on the new regulation protein, which is caused by the new regulation protein, and the information can be obtained by the shaft office in the terminal.

项目成果

Hayashi,K. et al.: "Changes in the balance of phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B (Akt) and the mitogen-activated protein kinases (ERK/p38MAPK) determine the phenotype of visceral and vascular smooth muscle cells"J.Cell.Biol.. 145. 727-740 (1999)

林，K.

Yamada.Y., et al.: "Modulation of the channel activity of the e2/z1-subtype of N-Methyl D-Aspartate Receptor by PSD-95"J.Biol.Chem.. 274. 6647-6652. (1999)

Yamada.Y. 等人：“PSD-95 对 N-甲基 D-天冬氨酸受体 e2/z1 亚型的通道活性的调节”J.Biol.Chem.. 274. 6647-6652。

Tadokoro,S., et al.: "Involvement of unique leucine-zipper motif of PSD-Zip45 (Homer 1c/vesl-1L) in group 1 metabotropic glutamate receptor clustreing."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 96. 13801-13806 (1999)

Tadokoro,S., et al.：“PSD-Zip45 (Homer 1c/vesl-1L) 独特的亮氨酸拉链基序参与第 1 组代谢型谷氨酸受体聚集。”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。

Okabe,S., et al.: "Activity-dependent bidirectional translocation of a postsynaptic density protein PSD-Zip45 (Homer 1c) in Hippocampal neurons"J.Neurosci. (in press). (2001)

Okabe,S., et al.：“海马神经元中突触后密度蛋白 PSD-Zip45 (Homer 1c) 的活动依赖性双向易位”J.Neurosci。

Yamada,Y., et al.: "Actinvation of channel activity of the NMDA receptor-PSD-95 complex by guanylate kinase-associated protein (GKAP) "FEBS Lett.. 458. 295-298 (1999)

Yamada,Y., et al.：“通过鸟苷酸激酶相关蛋白 (GKAP) 激活 NMDA 受体-PSD-95 复合物的通道活性”FEBS Lett.. 458. 295-298 (1999)