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ヒト神経芽腫細胞増殖抑制因子の分子作用機構と神経芽腫治療の可能性

人神经母细胞瘤细胞增殖抑制剂的分子机制及其治疗神经母细胞瘤的潜力

基本信息

批准号：
06282253
负责人：
加藤泰治
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

脳神経系での「液性因子によるニューロン・グリア相関」の研究を進める中、当該研究者らはラットグリアがマウス神経芽腫細胞の増殖を特異的に抑制するタンパク性因子(神経芽腫細胞増殖抑制因子:r-NGIF)を多量に産生していることを見い出した。今年度はヒト神経芽腫細胞増殖抑制因子(h-NGIF)の精製を試みた。当該研究者らの研究室で樹立したアストロサイトーマ(NAC-1)の無血清条件培養液を大量に調製し、エコノQ、エコノCM、スーパーロース120カラムを用い、ヒト神経芽腫細胞(TGW)の細胞増殖抑制活性を基準にして精製を試みた。活性は第3のカラムステップで消失し、条件培養液からの精製は困難と判断し、平行して検討してきた分子生物学的手法に切り替えることとした。つまり増殖相に発現が多く静止相に少ないh-NGIF発現量の差を利用した、ディファレンシアルハイブリダイゼーション法あるいはディファレンシアルディスプレイ法を用いてh-NGIFcDNAをクローニングすることにした。現在、増殖相と静止相のNAC-1細胞からそれぞれのcDNAライブラリーを作成することができ、増殖相特異的に発現するcDNAクローンを選択中である。えられたクローンをすべて塩基配列決定するとともに、プラスミドcDNAを直接発現ベクターに組みかえて、大腸菌あるいはCOS細胞にトランスフェクトし、発現されるタンパクの細胞増殖抑制活性を基にh-NGIFcDNAをクローニングする方法も試してみる。現在の生物活性測定法(TGWの細胞増殖抑制活性)はタンパクの直接発現法でも十分クローニングできる感度を持ち合わせている。

Research on the "liquid factor related to liquid factor"を入める中、When the researcher らはラットグリアがマウス神経blastoma cells The specific proliferative inhibitory factor (r-NGIF) produces large amounts of the proliferative inhibitory factor. This year's research on the purification of h-NGIF was carried out. When the researcher's laboratory was established, the serum-free conditioned culture medium (NAC-1) was prepared in a large amount, and a large amount of serum-free conditioned medium was prepared, such as Enoq and Eko.ノCM, スーパーロース120 カラムを use, ヒト神経blastoma cells (TGW) cell proliferation inhibitory activity benchmark にして purification test. It is difficult to judge whether the activity of the third nutrient solution has disappeared or the conditioned culture medium has been refined. The method of cutting off and paralleling is the molecular biology method.つまりProliferation phaseに発appearが多くstationary phaseに小ないh-NGIF発真人の differenceをutilizationした、ディファレンシアルハイブリダイゼーション法あるいはディファレンシアルディスプレイ法をいてh-NGIFcDNAをクローニングすることにした. Now, the proliferative phase and stationary phase of NAC-1 cells are divided into cDNA cells. Made of することができ, に発成するcDNA クローンを with specific reproduction phase, selected 中である.えられたクローンをすべて婩组determinedするとともに、プラスミドcDNA is directly produced by the coliform COS cell line Cell proliferation inhibitory activityをにh-NGIFcDNAをクローニングするmethodもtestしてみる. The current biological activity assay (TGW cell growth inhibitory activity) is a direct detection method that is very sensitive and sensitive.