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C_2様領域を持つ新しい蛋白質Rabphilin-3AとDoc2の機能と作用機構

具有C_2样区域的新蛋白Rabphilin-3A和Doc2的功能和作用机制

基本信息

批准号：
07268212
负责人：
佐々木卓也
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

私共の研究室では、2個のC2様領域を有する新しい蛋白質を2つ見い出し、それぞれRabphilin-3AとDoc2と命名している。これらの蛋白質は、シナプス小胞に局在し、そのC2様領域でCa^<2+>リン脂質に結合することから、神経伝達物質の放出においてCa^<2+>センサーとして機能している可能性が高い。Rabphilin-3Aは、C末端側のC2様領域以外に、N末端側にRab3A結合領域を有している。一方、Doc2は、C末端側にC2様領域を有しているが、N末端側にRab3A結合領域を有していない。また、どちらの蛋白質も膜貫通領域を有していないが、本年度の本研究で、Rabphilin-3Aは、N末端側でシナプス小胞上のアンカリング蛋白質に結合することによって、シナプス小胞に結合していることを明らかにした。したがって、Doc2にもシナプス小胞結合領域が存在し、Doc2は、そこを介して、シナプス小胞上のアンカリング蛋白質に結合していると考えられる。さらに、本年度の本研究で、Rabphilin-3AのN末端側またはC末端側のリコンビナント蛋白質をヤリイカの巨大シナプスにマククロインジェクションすると、神経伝達物質の放出が抑制されることを明らかにした。また、Rabphilin-3AやDoc2のN末端側またはC末端側の遺伝子をヒト成長ホルモン(GH)の遺伝子と共にPC12細胞に強制発現させると、高K^+刺激によるCa^<2+>依存性のGHの分泌が抑制されることを明らかにした。これらの結果から、Rabphilin-3AやDoc2はいくつかの機能領域に分けられ、各々の機能領域でそれぞれ特異的な蛋白質と結合し、蛋白質一蛋白質相互作用により神経伝達物質の放出を制御している可能性が示唆された。このように、本年度の本研究は予想以上に進展し、当初の目的はほぼ完全に達成することができた。

In the private laboratory, there are two new C2 domains: protein 2, Rabphilin-3A and Doc2. The protein is highly likely to be present in the cellular structure and in the C2 domain, Ca^<2+> is bound to lipids, and Ca^<2+> is highly likely to be released from the cellular structure and function. Rabphilin-3A has a presence in the Rab3A binding field on the N-terminal side in addition to the C2-like field on the C-terminal side. One side, Doc2 side, C2 side, Rab3A binding field on the N-terminal side In this study, Rabphilin-3A protein binding on the N-terminal side of the cell was investigated. Doc2 is the domain of cell binding, Doc2 is the domain of cell binding. In this year's study, Rabphilin-3A N-terminal side and C-terminal side of the protein production of a large range of protein, protein release inhibition, and other aspects of the study. The N-terminal side of Rabphilin-3A and Doc-2 is the opposite of the C-terminal side of the gene. The growth of GH (GH) is the opposite of that of the PC12 cells. The stress response and Ca^<2+>-dependent GH secretion are inhibited by high K^+ stimulation. The results showed that Rabphilin-3A and Doc2 could be divided into functional domains, and each functional domain had specific protein binding, protein-protein interaction, and the possibility of controlling the release of neurotransmitter substances. This year's study aims to achieve the above goals.